| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 抗生素在养殖业使用概况 | 第13-14页 |
| 1.1.1 抗生素 | 第13页 |
| 1.1.2 抗生素在养殖行业的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 细菌的抗生素抗性基因水平传播元件 | 第14-19页 |
| 1.2.1 转座子 | 第14-16页 |
| 1.2.2 质粒 | 第16-17页 |
| 1.2.3 整合子 | 第17-19页 |
| 1.3 Real-time PCR在ARGs研究中的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.1 Real-time PCR技术概述 | 第19页 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR技术分类 | 第19-20页 |
| 1.3.3 食品中抗生素抗性基因研究现状 | 第20页 |
| 1.4 RNAi技术-抑制ARGs的水平传播 | 第20-23页 |
| 1.4.1 RNAi技术的发展历程 | 第21页 |
| 1.4.2 RNAi技术的作用机制及应用 | 第21-23页 |
| 1.4.3 RNAi在原核生物中的应用潜质 | 第23页 |
| 1.5 本课题研究意义及主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 食品中ARGs的定量检测 | 第25-43页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与设备 | 第25-29页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.3 实验引物 | 第28-29页 |
| 2.2.4 样品及菌株来源 | 第29页 |
| 2.3 实验流程 | 第29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.4.1 样品采集和前处理 | 第29-30页 |
| 2.4.2 样品总DNA提取 | 第30-32页 |
| 2.4.3 样品总DNA的质量鉴定 | 第32页 |
| 2.4.4 实时荧光绝对定量PCR检测 | 第32-34页 |
| 2.5 结果 | 第34-40页 |
| 2.5.1 样品总DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.5.2 水产品及蔬果样品中ARGs的含量检测结果 | 第35-40页 |
| 2.6 讨论 | 第40-41页 |
| 2.7 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 肉类与粪便样品中ARGs的定量检测 | 第43-51页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与设备 | 第43-44页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第43页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.3 反应引物 | 第44页 |
| 3.2.4 样品及菌株来源 | 第44页 |
| 3.3 实验流程 | 第44页 |
| 3.4 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.4.1 样品采集及前处理 | 第44-45页 |
| 3.4.2 样品总DNA提取 | 第45-46页 |
| 3.4.3 样品总DNA质量检测 | 第46页 |
| 3.4.4 实时荧光绝对定量PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.5 结果 | 第47-49页 |
| 3.5.1 肉类产品ARGs定量结果 | 第47-48页 |
| 3.5.2 粪便样品ARGs定量结果 | 第48-49页 |
| 3.6 讨论 | 第49页 |
| 3.7 小结 | 第49-51页 |
| 第四章 si-RNA的设计及表达载体的合成 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 材料与设备 | 第51-53页 |
| 4.2.1 主要仪器与设备 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 样品及菌株来源 | 第52-53页 |
| 4.3 实验流程 | 第53页 |
| 4.4 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.4.1 si-RNA序列的设计 | 第53-55页 |
| 4.4.2 构建si-RNA表达载体 | 第55-56页 |
| 4.5 结果 | 第56-59页 |
| 4.6 讨论 | 第59页 |
| 4.7 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 Real-time PCR检测si-RNA对intI1 mRNA表达影响 | 第60-68页 |
| 5.1 前言 | 第60页 |
| 5.2 材料与设备 | 第60-62页 |
| 5.2.1 主要仪器与设备 | 第60页 |
| 5.2.2 主要实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.3 实验引物 | 第61页 |
| 5.2.4 实验菌株来源 | 第61-62页 |
| 5.3 实验流程 | 第62页 |
| 5.4 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.4.1 制备E.coli BL21（DE3）感受态细胞 | 第62-63页 |
| 5.4.2 PGPU6/GFP/Neo-siRNA电转至E.coli BL21（DE3） | 第63-64页 |
| 5.4.3 实时荧光定量PCR鉴定目的基因含量变化 | 第64-65页 |
| 5.5 结果 | 第65-66页 |
| 5.6 讨论 | 第66-67页 |
| 5.7 小结 | 第67-68页 |
| 结论与展望 | 第68-70页 |
| 一．结论 | 第68-69页 |
| 二．创新点 | 第69页 |
| 三．展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附件 | 第81页 |
