| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-34页 |
| ·酸胁迫及其对乳酸菌生长的影响 | 第15-16页 |
| ·菌自身产酸导致的酸胁迫 | 第15-16页 |
| ·外界环境引起的酸胁迫 | 第16页 |
| ·提高乳酸菌耐酸能力的方法 | 第16-18页 |
| ·筛选和分离新菌株 | 第16-17页 |
| ·生物育种 | 第17页 |
| ·添加营养物质 | 第17-18页 |
| ·实施交叉应激 | 第18页 |
| ·酸适应性反应 | 第18页 |
| ·乳酸菌的酸应激反应机制 | 第18-22页 |
| ·维持pH的自我平衡(pH homeostasis) | 第18-20页 |
| ·产生碱性物质 | 第20-21页 |
| ·酸应激反应的分子机制 | 第21-22页 |
| ·改变细胞膜组成 | 第22页 |
| ·蛋白质组学技术 | 第22-24页 |
| ·蛋白质组学概述 | 第23页 |
| ·蛋白质组学研究技术 | 第23-24页 |
| ·乳酸菌的蛋白质组学研究 | 第24-27页 |
| ·构建乳酸菌蛋白质组学2-DE图谱 | 第25页 |
| ·研究乳酸菌的功能及应用 | 第25页 |
| ·在适应性反应中的应用 | 第25-26页 |
| ·蛋白质组学在乳酸菌应激反应中的应用 | 第26-27页 |
| ·研究展望及设想 | 第27-28页 |
| 本章参考文献 | 第28-34页 |
| 第2章 L.brevis NCL912的耐酸性 | 第34-41页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·L.brevis NCL912的培养 | 第35页 |
| ·L.brevis NCL912在不同酸性pH下的生长 | 第35页 |
| ·比生长速率的计算方法 | 第35页 |
| ·pH和GABA的测定方法 | 第35-36页 |
| ·L.brevis NCL912在pH2.0条件下的存活实验 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·L.brevis NCL912的生长曲线及发酵培养液pH的变化 | 第36-37页 |
| ·发酵培养基中GABA的变化 | 第37-38页 |
| ·L.brevis NCL912在pH2.0条件下的存活情况 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39页 |
| 本章参考文献 | 第39-41页 |
| 第3章 L-MSG对L.brevis NCL912耐酸性的影响及其可能的酸应激反应机制 | 第41-51页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·主要仪器和设备 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·L.brevis NCL912的培养 | 第43页 |
| ·L-MSG对L.brevis NCL912生长的影响 | 第43页 |
| ·比生长速率的计算方法 | 第43页 |
| ·pH和GABA的测定方法 | 第43页 |
| ·在pH 2.0条件下,L-MSG对L.brevis NCL912存活的影响 | 第43页 |
| ·粗酶提取液的制备 | 第43-44页 |
| ·GAD酶的活性测定 | 第44页 |
| ·统计学分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·L-MSG对L.brevis NCL912生长和培养基pH变化的影响 | 第44-45页 |
| ·培养液中GABA的变化 | 第45-46页 |
| ·在pH 2.0条件下,L-MSG对L.brevis NCL912存活的影响 | 第46-47页 |
| ·L-MSG对GAD酶活的影响 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 本章参考文献 | 第49-51页 |
| 第4章 L.brevis NCL912在酸胁迫下的差异蛋白表达 | 第51-62页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料 | 第51-53页 |
| ·菌株 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·主要仪器和设备 | 第51-52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·L.brevis NCL912差异蛋白质组学研究技术路线 | 第53-54页 |
| ·L.brevis NCL912破壁处理 | 第54页 |
| ·L.brevis NCL912全蛋白的提取 | 第54页 |
| ·丙酮沉淀蛋白质 | 第54页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第54-56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·L.brevis NCL912在pH5.0和4.0条件下的蛋白质浓度 | 第56-57页 |
| ·L.brevis NCL912在pH5.0和pH4.0条件下的差异蛋白谱图分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·蛋白质破壁方法的确定 | 第58-59页 |
| ·乳酸菌蛋白质组学研究 | 第59页 |
| ·小结 | 第59页 |
| 本章参考文献 | 第59-62页 |
| 第5章 酸胁迫下L.brevis NCL912差异表达蛋白的鉴定及分析 | 第62-72页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·研究对象 | 第62页 |
| ·主要仪器和设备 | 第62-63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·胶内酶切 | 第63-64页 |
| ·质谱检测 | 第64页 |
| ·数据库检索 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·差异蛋白质点的质谱分析及生物信息学检索 | 第64-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·应激蛋白 | 第68页 |
| ·与蛋白质合成相关的蛋白 | 第68-69页 |
| ·与DNA合成相关的蛋白 | 第69页 |
| ·与糖酵解代谢相关的蛋白质 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70页 |
| 本章参考文献 | 第70-72页 |
| 第6章 L.brevis NCL912部分差异蛋白的转录学水平验证 | 第72-84页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·菌株 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72-73页 |
| ·主要仪器和设备 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·L.brevis NCL912在pH 5.0和4.0条件下总RNA的提取 | 第73-74页 |
| ·反转录反应与实时荧光定量PCR扩增 | 第74-75页 |
| ·定量分析方法及统计学分析 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-79页 |
| ·L.brevis NCL912在pH 5.0和4.0条件下的总RNA | 第75页 |
| ·内参基因荧光定量标准曲线的绘制 | 第75-76页 |
| ·实时荧光定量PCR结果 | 第76-78页 |
| ·CBS结构域蛋白和假设蛋白LVIS_0520 mRNA表达的分析及比较 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| ·荧光染料的选择 | 第79-81页 |
| ·数据定量方法的选择 | 第81页 |
| ·mRNA与蛋白质表达水平不一致的原因分析 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82页 |
| 本章参考文献 | 第82-84页 |
| 第7章 添加L-MSG培养基培养的L.brevis NCL912在酸胁迫下的差异蛋白表达 | 第84-102页 |
| ·引言 | 第84页 |
| ·材料 | 第84-86页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84页 |
| ·主要仪器和设备 | 第84-85页 |
| ·主要试剂 | 第85-86页 |
| ·主要溶液的配制 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-87页 |
| ·L.brevis NCL912在添加L-MSG培养基中的培养 | 第86页 |
| ·添加L-MSG培养基培养的L.brevis NCL912酸胁迫下的蛋白质组学研究 | 第86页 |
| ·部分差异蛋白的转录学水平验证 | 第86-87页 |
| ·统计学分析方法 | 第87页 |
| ·结果 | 第87-96页 |
| ·添加L-MSG培养基培养的L.brevis NCL912在pH5.0和pH4.0条件下的蛋白质浓度 | 第87页 |
| ·添加L-MSG培养基培养的L.brevis NCL912在pH5.0和pH4.0条件下的差异蛋白谱图分析 | 第87-89页 |
| ·差异蛋白质点的质谱分析及生物信息学检索 | 第89-92页 |
| ·实时荧光定量PCR结果 | 第92-95页 |
| ·部分差异蛋白mRNA表达水平的分析及比较 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·酸胁迫诱导的蛋白 | 第96-98页 |
| ·L-MSG诱导的蛋白 | 第98-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 本章参考文献 | 第100-102页 |
| 结论与创新之处 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 附录一 已鉴定蛋白质的一级质谱图 | 第105-113页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第113页 |
