| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 热荚硫细菌KA3 | 第10页 |
| 1.2 差向异构酶 | 第10-12页 |
| 1.2.1 差向异构酶的概念 | 第11页 |
| 1.2.2 差向异构酶的分类 | 第11页 |
| 1.2.3 差向异构酶的作用和用途 | 第11-12页 |
| 1.3 UDP-葡萄糖4-差向异构酶 | 第12-19页 |
| 1.3.1 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的来源 | 第13页 |
| 1.3.2 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的结构 | 第13-14页 |
| 1.3.3 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的催化机理 | 第14-16页 |
| 1.3.4 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的主要性质 | 第16-18页 |
| 1.3.5 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的基因克隆、表达和改造 | 第18-19页 |
| 1.4 本课题研究意义、主要内容及创新点 | 第19-21页 |
| 1.4.1 本课题研究意义 | 第19-20页 |
| 1.4.2 本课题主要内容 | 第20页 |
| 1.4.3 本课题创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 UDP-葡萄糖4-差向异构酶的基因克隆 | 第21-35页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 目的基因gale优化和扩增 | 第23-25页 |
| 2.2.2 酶切反应和产物回收 | 第25页 |
| 2.2.3 连接反应和产物纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 连接产物转化至E.coli DH5α感受态细胞 | 第26-27页 |
| 2.2.5 阳性克隆筛选和鉴定 | 第27页 |
| 2.2.6 重组质粒转化至 E.coli BL21(DE3)感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-34页 |
| 2.3.1 目的基因gale优化和扩增 | 第28-32页 |
| 2.3.2 电转化条件优化结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 目标蛋白mGalE诱导表达和分离纯化 | 第35-49页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第35页 |
| 3.1.2 培养基 | 第35页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 目标蛋白mGalE诱导表达 | 第36-37页 |
| 3.2.2 可溶性蛋白提取 | 第37页 |
| 3.2.3 目标蛋白mGalE酶活性检测 | 第37-38页 |
| 3.2.4 目标蛋mGalE诱导条件优化 | 第38-39页 |
| 3.2.5 Ni~(2+)亲和层析 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| 3.3.1 目标蛋白mGalE诱导表达 | 第40页 |
| 3.3.2 目标蛋白mGalE酶活性检测 | 第40-44页 |
| 3.3.3 目标蛋白mGalE诱导条件优化 | 第44-47页 |
| 3.3.4 目标蛋白mGalE亲和层析 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 目标蛋白mGalE酶学性质研究 | 第49-58页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 方法 | 第50-51页 |
| 4.2.1 底物专一性 | 第50页 |
| 4.2.2 pH对酶活性和稳定性的影响 | 第50页 |
| 4.2.3 温度对酶活性和稳定性的影响 | 第50-51页 |
| 4.2.4 金属离子对酶活性的影响 | 第51页 |
| 4.2.5 化学物质对酶活性的影响 | 第51页 |
| 4.2.6 动力学常数 | 第51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-57页 |
| 4.3.1 底物专一性 | 第52页 |
| 4.3.2 pH对酶活性和稳定性的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.3 温度对酶活性和稳定性的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.4 金属离子对酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.5 化学物质对酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.6 动力学常数 | 第56-57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 结论与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 附录1：热荚硫细菌KA3 UDP-葡萄糖4-差向异构酶氨基酸序列 | 第69页 |
| 附录2：大肠杆菌K12 UDP-葡萄糖4-差向异构酶氨基酸序列 | 第69页 |
| 附录3：人UDP-葡萄糖4-差向异构酶氨基酸序列 | 第69-70页 |
| 附录4：大肠杆菌偏爱密码子列表 | 第70-71页 |
| 附录5：人工合成基因序列与原始序列比对 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
