| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 图表目录 | 第13-15页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-33页 |
| 0.1 概述 | 第16-17页 |
| 0.2 抗菌肽的结构 | 第17-18页 |
| 0.2.1 α-螺旋结构抗菌肽 | 第17页 |
| 0.2.2 β-折叠结构抗菌肽 | 第17-18页 |
| 0.2.3 环状结构的抗菌肽 | 第18页 |
| 0.2.4 伸展性结构抗菌肽 | 第18页 |
| 0.3 抗菌肽的作用机制 | 第18-20页 |
| 0.3.1 抗菌肽与膜之间相互吸引 | 第18页 |
| 0.3.2 附着-插入 | 第18-20页 |
| 0.3.2.1 桶板模型 | 第19页 |
| 0.3.2.2 毯式模型 | 第19页 |
| 0.3.2.3 环形孔模型 | 第19-20页 |
| 0.3.3 胞内作用 | 第20页 |
| 0.4 抗菌肽的基因工程表达 | 第20-26页 |
| 0.4.1 抗菌肽的基因工程表达系统 | 第20-22页 |
| 0.4.1.1 动植物表达系统 | 第20页 |
| 0.4.1.2 昆虫表达系统 | 第20-21页 |
| 0.4.1.3 酵母表达系统 | 第21页 |
| 0.4.1.4 大肠杆菌表达系统 | 第21-22页 |
| 0.4.2 抗菌肽在大肠杆菌表达系统中的表达策略 | 第22-26页 |
| 0.4.2.1 pET 载体系统 | 第22-23页 |
| 0.4.2.2 抗菌肽的融合表达 | 第23-24页 |
| 0.4.2.3 融合表达抗菌肽标签的去除 | 第24-26页 |
| 0.5 包涵体的处理 | 第26-28页 |
| 0.5.1 包涵体分离 | 第26页 |
| 0.5.2 包涵体洗涤 | 第26-27页 |
| 0.5.3 包涵体溶解 | 第27页 |
| 0.5.4 包涵体复性 | 第27-28页 |
| 0.6 His-tag 融合蛋白的分离纯化 | 第28页 |
| 0.7 抗菌肽及表皮生长因子（hEGF）的生物学功能 | 第28-32页 |
| 0.7.1 抗菌肽的生物学功能 | 第28-30页 |
| 0.7.1.1 抗菌肽的抗细菌功能 | 第29页 |
| 0.7.1.2 抗菌肽的抗病毒功能 | 第29页 |
| 0.7.1.3 抗菌肽的抗真菌功能 | 第29页 |
| 0.7.1.4 抗菌肽的抗肿瘤功能 | 第29-30页 |
| 0.7.1.5 抗菌肽的溶血活性 | 第30页 |
| 0.7.1.6 抗菌肽的其它生物学作用 | 第30页 |
| 0.7.2 抗菌肽的应用前景 | 第30-31页 |
| 0.7.2.1 医药研究领域的前景 | 第30页 |
| 0.7.2.2 农业、畜牧业领域的前景 | 第30-31页 |
| 0.7.2.3 食品工业领域的前景 | 第31页 |
| 0.7.3 表皮生长因子（hEGF）的生物学功能 | 第31-32页 |
| 0.8 本文目的与意义 | 第32-33页 |
| 第1章 hEGF-AWRK6 原核融合表达载体的构建 | 第33-47页 |
| 1.1 引言 | 第33-34页 |
| 1.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 1.2.1 菌株和质粒 | 第34页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第34页 |
| 1.2.3 实验仪器 | 第34-35页 |
| 1.2.4 溶液与培养基的配制 | 第35页 |
| 1.3 实验方法 | 第35-41页 |
| 1.3.1 实验策略 | 第35-36页 |
| 1.3.2 融合多肽基因序列设计及合成 | 第36页 |
| 1.3.3 pET-30a(+)质粒及 pMD-18 重组质粒的制备 | 第36-37页 |
| 1.3.4 重组表达质粒 pET-30a(+)-hEGF-AWRK6 的构建 | 第37-41页 |
| 1.3.4.1 粘性末端的制备 | 第37-38页 |
| 1.3.4.2 酶切产物的连接 | 第38-39页 |
| 1.3.4.3 大肠杆菌 JM109 感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 1.3.4.4 重组质粒的转化 | 第40页 |
| 1.3.4.5 阳性克隆的筛选 | 第40-41页 |
| 1.3.4.6 阳性重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的双酶切验证 | 第41页 |
| 1.3.4.7 阳性重组菌的测序与分析 | 第41页 |
| 1.3.5 阳性重组表达菌株大肠杆菌 BL21(DE3)的获得 | 第41页 |
| 1.3.5.1 重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的制备 | 第41页 |
| 1.3.5.2 重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的转化 | 第41页 |
| 1.3.5.3 阳性重组菌株的 PCR 鉴定 | 第41页 |
| 1.4 结果 | 第41-45页 |
| 1.4.1 pET-30a(+)质粒及 pMD-18 重组质粒的提取 | 第41-42页 |
| 1.4.2 粘性末端的制备 | 第42页 |
| 1.4.3 阳性重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| 1.4.4 阳性重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的双酶切及测序验证 | 第43-44页 |
| 1.4.5 阳性重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 的提取 | 第44-45页 |
| 1.4.6 重组质粒 pET-30a(+)- hEGF-AWRK6 转化 BL21(DE3)的 PCR 验证 | 第45页 |
| 1.5 结论 | 第45-47页 |
| 第2章 融合多肽 hEGF-AWRK6 的表达条件优化及分离纯化 | 第47-60页 |
| 2.1 引言 | 第47页 |
| 2.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 2.2.1 菌株 | 第47页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第47页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第48-49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 2.3.1 pET-30a(+)-hEGF-AWRK6 转化菌株 BL21(DE3)的活化与诱导表达 | 第49-50页 |
| 2.3.2 诱导产物的 SDS-PAGE 分析 | 第50页 |
| 2.3.3 融合多肽的 Western Blot 鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.4 融合多肽 hEGF-AWRK6 表达工艺优化 | 第51-52页 |
| 2.3.4.1 表达时间优化 | 第51页 |
| 2.3.4.2 IPTG 诱导浓度优化 | 第51-52页 |
| 2.3.4.3 表达温度优化 | 第52页 |
| 2.3.5 融合多肽 hEGF-AWRK6 的表达方式分析 | 第52页 |
| 2.3.6 融合多肽 hEGF-AWRK6 的分离纯化 | 第52-54页 |
| 2.3.6.1 包涵体的处理 | 第52-53页 |
| 2.3.6.2 融合多肽 hEGF-AWRK6 的分离纯化及除盐冻干 | 第53页 |
| 2.3.6.3 融合多肽 hEGF-AWRK6 活性的初步检测 | 第53页 |
| 2.3.6.4 融合多肽 His 标签的去除 | 第53-54页 |
| 2.4 结果 | 第54-59页 |
| 2.4.1 融合多肽 hEGF-AWRK6 在大肠杆菌中的表达 | 第54页 |
| 2.4.2 融合多肽 hEGF-AWRK6 的 Western blot 鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4.3 融合多肽 hEGF-AWRK6 表达条件优化 | 第55-56页 |
| 2.4.4 融合多肽 hEGF-AWRK6 的表达方式分析 | 第56页 |
| 2.4.5 融合多肽 hEGF-AWRK6 的亲和层析纯化 | 第56-57页 |
| 2.4.6 融合多肽 hEGF-AWRK6 活性的初步检测 | 第57-58页 |
| 2.4.7 融合多肽 hEGF-AWRK6 His 标签的去除 | 第58-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-60页 |
| 第3章 融合多肽 HEGF-AWRK6 的功能研究 | 第60-77页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 3.2.1 菌株和细胞 | 第60页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第60页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第60-61页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-66页 |
| 3.3.1 融合多肽 hEGF-AWRK6 的体外活性检测 | 第61-62页 |
| 3.3.1.1 融合多肽 hEGF-AWRK6 的抑菌活性检测 | 第61-62页 |
| 3.3.1.2 MTT 方法检测融合多肽 hEGF-AWRK6 对 NIH3T3 增殖活性的影响 | 第62页 |
| 3.3.1.3 划痕实验检测融合多肽 hEGF-AWRK6 对 NIH3T3 细胞迁移的影响 | 第62页 |
| 3.3.2 融合多肽 hEGF-AWRK6 的体内活性检测 | 第62-66页 |
| 3.3.2.1 小鼠烫伤模型的建立 | 第62-63页 |
| 3.3.2.2 实验动物的分组及处理 | 第63页 |
| 3.3.2.3 抑菌组融合多肽 hEGF-AWRK6 的功能检测 | 第63-64页 |
| 3.3.2.4 愈合组融合多肽 hEGF-AWRK6 的功能检测 | 第64-66页 |
| 3.4 实验结果 | 第66-76页 |
| 3.4.1 融合多肽 hEGF-AWRK6 的体外活性检测 | 第66-70页 |
| 3.4.1.1 融合多肽 hEGF-AWRK6 的抑菌活性检测 | 第66-67页 |
| 3.4.1.2 融合多肽 hEGF-AWRK6 促进 NIH3T3 细胞增殖作用检测 | 第67-69页 |
| 3.4.1.3 融合多肽 hEGF-AWRK6 对 NIH3T3 细胞迁移的影响 | 第69-70页 |
| 3.4.2 融合多肽 hEGF-AWRK6 的体内活性检测 | 第70-76页 |
| 3.4.2.1 抑菌组融合多肽 hEGF-AWRK6 的功能检测 | 第70-72页 |
| 3.4.2.2 愈合组融合多肽 hEGF-AWRK6 的功能检测 | 第72-76页 |
| 3.5 讨论 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第84-85页 |
