| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 高压技术与食品加工 | 第11-13页 |
| 1.1.1 高压技术概述 | 第11页 |
| 1.1.2 高压食品加工及应用 | 第11-13页 |
| 1.2 高压生物科学与高压生物技术 | 第13-17页 |
| 1.2.1 高压生物科学与高压生物技术概述 | 第13页 |
| 1.2.2 高压技术在生物领域中的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 高压对蛋白质的热稳定性影响 | 第14页 |
| 1.2.4 压力调控酶活力的热力学机制 | 第14-15页 |
| 1.2.5 高压下蛋白质的构象变化 | 第15-17页 |
| 1.3 食品中的脂肪酶 | 第17-21页 |
| 1.3.1 脂肪酶的来源、功能和应用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 脂肪酶的催化机理和调控催化行为的方法 | 第18-21页 |
| 1.4 分子动力学模拟 | 第21-23页 |
| 1.4.1 分子动力学模拟概述 | 第21-22页 |
| 1.4.2 高压体系下的分子动力学模拟 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题的立题依据、研究意义及主要研究内容 | 第23-25页 |
| 1.5.1 本课题的立题依据和研究意义 | 第23页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 高压处理脂肪酶的催化行为 | 第25-37页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3 脂肪酶活力的测定 | 第26页 |
| 2.2.4 酶液的高压处理 | 第26页 |
| 2.2.5 高压下RCL、CRL的酯化活力 | 第26页 |
| 2.2.6 底物摩尔比对酯化率的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.7 有机溶剂对酯化活力的影响 | 第27页 |
| 2.2.8 高压下CRL催化酯合成的反应机制及动力学 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-36页 |
| 2.3.1 高压处理对脂肪酶催化能力的影响 | 第27-30页 |
| 2.3.2 反应体系对CRL催化能力的影响 | 第30-33页 |
| 2.3.3 高压下CRL酯化反应进程 | 第33-34页 |
| 2.3.4 高压下CRL酯化反应机制 | 第34-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 高压处理后RCL的构象变化 | 第37-60页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第38页 |
| 3.2.3 RCL脂肪酶的纯化和活力测定 | 第38页 |
| 3.2.4 蛋白纯度鉴定 | 第38页 |
| 3.2.5 RCL的高压处理 | 第38页 |
| 3.2.6 圆二色谱（CD）测定 | 第38-39页 |
| 3.2.7 荧光测定 | 第39页 |
| 3.2.8 荧光淬灭 | 第39-40页 |
| 3.2.9 二硫键含量的测定 | 第40页 |
| 3.2.10 粒径分析 | 第40页 |
| 3.2.11 原子力显微镜（AFM）测定 | 第40页 |
| 3.2.12 分子模拟 | 第40-41页 |
| 3.2.13 分子对接 | 第41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-59页 |
| 3.3.1 RCL的分离与纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.2 高压处理后RCL二级结构的变化 | 第42-44页 |
| 3.3.3 高压处理后RCL三级结构的变化 | 第44-48页 |
| 3.3.4 高压诱导RCL分子的解折叠过程 | 第48-53页 |
| 3.3.5 分子模拟高压下RCL的构象变化 | 第53-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 高压处理RCL的水解动力学及其与构象变化的联系 | 第60-71页 |
| 4.1 前言 | 第60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第60页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.3 酶液的高压处理 | 第61页 |
| 4.2.4 脂肪酶水解反应速率的测定 | 第61页 |
| 4.2.5 高压后RCL水解反应动力学 | 第61-62页 |
| 4.2.6 界面催化行为的测定 | 第62页 |
| 4.2.7 分子动力学模拟 | 第62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-70页 |
| 4.3.1 高压处理后的水解动力学曲线 | 第62-63页 |
| 4.3.2 高压处理后的水解动力学参数 | 第63-64页 |
| 4.3.3 温度对激活体积的影响 | 第64-66页 |
| 4.3.4 压力处理对界面催化行为的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.5 脂肪酶中氨基酸残基的运动 | 第67-68页 |
| 4.3.6 盖子的移动 | 第68-70页 |
| 4.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 高压和其它环境因子共同作用下RCL的行为 | 第71-91页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第71页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第71-72页 |
| 5.2.3 脂肪酶活力的测定 | 第72页 |
| 5.2.4 RCL的高压处理 | 第72页 |
| 5.2.5 温度对RCL活性的影响 | 第72页 |
| 5.2.6 压力和温度对RCL热稳定性的影响 | 第72页 |
| 5.2.7 温度—压力协同作用下RCL的热失活动力学 | 第72页 |
| 5.2.8 盐离子对RCL酶活的影响 | 第72-73页 |
| 5.2.9 盐离子对RCL热稳定性的影响 | 第73页 |
| 5.2.10 盐离子对RCL折叠展开的影响 | 第73页 |
| 5.2.11 不同缓冲液中多羟基醇对RCL热稳定性的影响 | 第73页 |
| 5.2.12 多羟基醇对RCL的热保护作用 | 第73页 |
| 5.2.13 荧光的测定 | 第73页 |
| 5.2.14 分子模拟 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-90页 |
| 5.3.1 高压与温度共同作用下RCL的催化活性 | 第74-75页 |
| 5.3.2 压力和温度对RCL热稳定性的协同作用 | 第75-77页 |
| 5.3.3 温度-压力二元作用下的热力学分析 | 第77-79页 |
| 5.3.4 盐离子对RCL的影响 | 第79-86页 |
| 5.3.5 多羟基醇对RCL的稳定作用 | 第86-90页 |
| 5.4 本章小结 | 第90-91页 |
| 第六章 原位检测研究高压下RCL构象变化和催化行为 | 第91-104页 |
| 6.1 前言 | 第91页 |
| 6.2 材料与方法 | 第91-93页 |
| 6.2.1 主要试剂 | 第91页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第91-92页 |
| 6.2.3 高压下内源荧光的测定 | 第92页 |
| 6.2.4 高压下反应体系的处理 | 第92页 |
| 6.2.5 高压下脂肪酶水解反应速率的测定 | 第92-93页 |
| 6.2.6 分子动力学模拟 | 第93页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第93-103页 |
| 6.3.1 常压下荧光强度与酶活的关系 | 第93-94页 |
| 6.3.2 高压下的水解反应 | 第94-95页 |
| 6.3.3 RCL构象的原位在线检测 | 第95-97页 |
| 6.3.4 分子模拟RCL在高压下的构象状态 | 第97-103页 |
| 6.4 本章小结 | 第103-104页 |
| 主要结论与展望 | 第104-106页 |
| 主要结论 | 第104-105页 |
| 展望 | 第105-106页 |
| 论文创新点 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-120页 |
| 附录Ⅰ | 第120-125页 |
| 附录Ⅱ：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第125页 |
