| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第15-31页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 谷胱甘肽概述 | 第15-23页 |
| 1.2.1 谷胱甘肽的结构、性质与分布 | 第15-17页 |
| 1.2.2 谷胱甘肽的生理功能与应用 | 第17-19页 |
| 1.2.3 谷胱甘肽的生产方法 | 第19-21页 |
| 1.2.4 谷胱甘肽含量的测定 | 第21-23页 |
| 1.3 谷胱甘肽的生物合成途径及其关键酶研究 | 第23-25页 |
| 1.3.1 谷胱甘肽的生物合成途径 | 第23-24页 |
| 1.3.2 谷胱甘肽合成中的关键酶及其表达调控 | 第24-25页 |
| 1.4 乳酸菌及其产谷胱甘肽的研究现状 | 第25-29页 |
| 1.4.1 乳酸菌及其在食品工业中的应用 | 第25-26页 |
| 1.4.2 乳酸菌的分类鉴定 | 第26-27页 |
| 1.4.3 产GSH乳酸菌的研究现状 | 第27-28页 |
| 1.4.4 乳酸菌表达宿主菌 | 第28-29页 |
| 1.5 论文主要目的及内容 | 第29-31页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第29页 |
| 1.5.2 究内容 | 第29-30页 |
| 1.5.3 研究技术路线 | 第30-31页 |
| 2 高积累谷胱甘肽乳酸菌的筛选及鉴定 | 第31-45页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第31-33页 |
| 2.2.1 实验原料 | 第31页 |
| 2.2.2 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2.3 主要试剂及试剂盒 | 第32页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.3.1 菌种分离、纯化和保存 | 第33-34页 |
| 2.3.2 分析测定方法 | 第34-35页 |
| 2.3.3 菌种形态学观察 | 第35-36页 |
| 2.3.4 菌种生理生化鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.5 菌种16S rDNA分子生物学鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.6 菌种的生长特性 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-44页 |
| 2.4.1 含GSH的乳酸菌的分离筛选 | 第40-41页 |
| 2.4.2 菌株A4的鉴定 | 第41-44页 |
| 2.4.3 菌株生长特性 | 第44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 3 副干酪乳杆菌潜在谷胱甘肽合成酶的重组表达与功能鉴定 | 第45-64页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第45-47页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第45-46页 |
| 3.2.2 培养基与抗生素 | 第46-47页 |
| 3.2.3 工具酶与试剂盒 | 第47页 |
| 3.2.4 化学试剂 | 第47页 |
| 3.2.5 主要实验仪器 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-55页 |
| 3.3.1 大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化 | 第47-48页 |
| 3.3.2 乳酸乳球菌感受态细胞制备及质粒电击转化 | 第48-49页 |
| 3.3.3 质粒抽提方法 | 第49页 |
| 3.3.4 gshF_(Lp)基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.5 重组载体及工程菌株的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.6 重组大肠杆菌的诱导表达及粗酶液的制备 | 第52-53页 |
| 3.3.7 重组乳酸乳球菌的诱导表达及粗酶液的制备 | 第53页 |
| 3.3.8 蛋白纯化与SDS-PAGE检测 | 第53-55页 |
| 3.3.9 GshF蛋白活性分析 | 第55页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第55-62页 |
| 3.4.1 副干酪乳杆菌潜在谷胱甘肽合成酶基因的克隆与序列分析 | 第55-59页 |
| 3.4.2 GshF_(Lp)重组表达工程菌株的验证 | 第59-60页 |
| 3.4.3 副干酪乳杆菌谷胱甘肽合成酶的表达与纯化 | 第60-61页 |
| 3.4.4 重组酶活性分析 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 4 嗜热链球菌谷胱甘肽合成酶在副干酪乳杆菌中的重组表达 | 第64-72页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第64-66页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第64-65页 |
| 4.2.2 培养基与抗生素 | 第65页 |
| 4.2.3 工具酶与试剂盒 | 第65页 |
| 4.2.4 化学试剂 | 第65-66页 |
| 4.2.5 主要实验仪器 | 第66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-69页 |
| 4.3.1 嗜热链球菌基因组DNA的提取 | 第66页 |
| 4.3.2 嗜热链球菌gshF_(St)基因的克隆 | 第66-67页 |
| 4.3.3 重组表达载体的构建 | 第67页 |
| 4.3.4 副干酪乳杆菌感受态细胞制备及电转化 | 第67-68页 |
| 4.3.5 阳性菌株的筛选及鉴定 | 第68页 |
| 4.3.6 重组酶的表达及分析 | 第68-69页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第69-71页 |
| 4.4.1 gshF_(St)基因的PCR扩增结果 | 第69页 |
| 4.4.2 表达载体pMG36e-gshF_(St)的构建与鉴定 | 第69-70页 |
| 4.4.3 重组酶的表达 | 第70-71页 |
| 4.4.4 重组副干酪乳杆菌产GSH能力的测定 | 第71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 5 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
