| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 葡萄糖-1-磷酸的性质 | 第14页 |
| 1.2 葡萄糖-1-磷酸的功能及应用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 葡萄糖-1-磷酸在生物体内的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.2 葡萄糖-1-磷酸在医药方面的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 葡萄糖-1-磷酸的生产现状 | 第16-18页 |
| 1.4 葡聚糖磷酸化酶 | 第18-23页 |
| 1.4.1 研究背景 | 第18-20页 |
| 1.4.2 GPase蛋白结构及调节机制 | 第20-21页 |
| 1.4.3 GPase催化机制 | 第21-22页 |
| 1.4.4 GPase的应用 | 第22-23页 |
| 1.5 中国淀粉现状 | 第23-25页 |
| 1.5.1 玉米淀粉的结构与性质 | 第23-24页 |
| 1.5.2 玉米淀粉的特性 | 第24页 |
| 1.5.3 玉米淀粉利用现状 | 第24-25页 |
| 1.6 本课题的基本思路和研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 质粒与菌株 | 第27页 |
| 2.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.3 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.4 培养基及培养条件 | 第29-30页 |
| 2.4.1 培养基 | 第29页 |
| 2.4.2 工程菌的培养条件 | 第29-30页 |
| 2.5 酶蛋白提取及纯化 | 第30-32页 |
| 2.5.1 酶蛋白破胞提取 | 第30页 |
| 2.5.2 蛋白浓度的测定 | 第30页 |
| 2.5.3 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第30页 |
| 2.5.4 蛋白纯化 | 第30-32页 |
| 2.6 检测与分析方法 | 第32-36页 |
| 2.6.1 菌体浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.6.2 DNS测定还原糖含量 | 第33-34页 |
| 2.6.3 GPase酶活测定 | 第34页 |
| 2.6.4 G-1-P浓度测定 | 第34-36页 |
| 2.6.5 反应液粘度测定 | 第36页 |
| 2.7 酶学性质研究 | 第36页 |
| 2.8 体外酶催化反应研究 | 第36-37页 |
| 第三章 Pyrococcus furiosus来源的GPase在大肠杆菌中的重组表达、分离纯化及酶学性质研究 | 第37-58页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 质粒、菌株与培养基 | 第37-38页 |
| 3.2.2 工具酶及主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 3.3.1 GPase基因全合成 | 第39-42页 |
| 3.3.2 分子生物学相关操作 | 第42页 |
| 3.3.3 重组质粒构建 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组蛋白的表达纯化 | 第43-44页 |
| 3.3.5 GPase诱导条件优化 | 第44-45页 |
| 3.3.6 酶学性质研究 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-57页 |
| 3.4.1 pET-28a-GP重组质粒的构建 | 第46页 |
| 3.4.2 GPase的诱导表达 | 第46-47页 |
| 3.4.3 GPase诱导表达条件优化 | 第47-51页 |
| 3.4.4 GPase蛋白纯化 | 第51-52页 |
| 3.4.5 重组GPase酶学性质研究 | 第52-57页 |
| 3.5 本章总结 | 第57-58页 |
| 第四章 GPase催化淀粉产葡萄糖-1-磷酸 | 第58-67页 |
| 4.1 引言 | 第58-59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 菌体培养 | 第59页 |
| 4.2.2 蛋白提取及纯化 | 第59页 |
| 4.2.3 反应液粘度测定 | 第59页 |
| 4.2.4 酶催化反应 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与分析 | 第60-65页 |
| 4.3.1 催化不同淀粉产G-1-P | 第60-62页 |
| 4.3.2 反应体系的预处理 | 第62-63页 |
| 4.3.3 高浓度底物催化 | 第63-64页 |
| 4.3.4 补料催化 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 葡萄糖-1-磷酸的分离纯化 | 第67-74页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 材料与方法 | 第67-69页 |
| 5.2.1 反应液制备 | 第67-68页 |
| 5.2.2 G-1-P的分离纯化 | 第68-69页 |
| 5.3 结果与分析 | 第69-73页 |
| 5.3.1 大分子物质分离中乙醇添加量对G-1-P收率的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.2 小分子物质的分离 | 第70-71页 |
| 5.3.3 磷酸盐分离过程中乙酸镁的添加量对G-1-P收率的影响 | 第71页 |
| 5.3.4 乙醇沉淀G-1-P | 第71-72页 |
| 5.3.5 不同反应液中G-1-P的分离纯化 | 第72-73页 |
| 5.4 本章小结 | 第73-74页 |
| 第六章 结论与展望 | 第74-77页 |
| 6.1 课题总结 | 第74-76页 |
| 6.2 课题展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 作者简历 | 第83页 |
| 教育背景 | 第83页 |
| 攻读硕士学位论文期间研究成果 | 第83页 |
