| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 酿酒酵母概述 | 第7-8页 |
| 1.2 酿酒酵母孢子 | 第8-10页 |
| 1.2.1 酵母孢子的产生及孢子壁概述 | 第8-9页 |
| 1.2.2 酿酒酵母孢子作为口服药物载体的可行性 | 第9-10页 |
| 1.3 CpG ODN | 第10-11页 |
| 1.3.1 CpG ODN概述及免疫刺激活性 | 第10-11页 |
| 1.3.2 CpG ODN应用面临的问题 | 第11页 |
| 1.3.3 CpG ODN递送系统 | 第11页 |
| 1.4 胰高血糖素样肽-1（GLP-1） | 第11-13页 |
| 1.4.1 糖尿病简介 | 第11-12页 |
| 1.4.2 GLP-1 简介及功能 | 第12页 |
| 1.4.3 GLP-1 面临的问题及解决方法 | 第12-13页 |
| 1.5 本论文的研究意义及其主要研究内容 | 第13-15页 |
| 1.5.1 本论文的研究意义 | 第13-14页 |
| 1.5.2 本论文的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第15-16页 |
| 2.1.2 酶，试剂及耗材 | 第16-17页 |
| 2.1.3 培养基及缓冲液 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-29页 |
| 2.2.1 酿酒酵母孢子的获得及纯化 | 第18-19页 |
| 2.2.2 酿酒酵母孢子与载药复合物的Zeta电位表征 | 第19页 |
| 2.2.3 酿酒酵母孢子载体复合物表征 | 第19-20页 |
| 2.2.4 小鼠巨噬细胞复苏及传代培养 | 第20-21页 |
| 2.2.5 酿酒酵母孢子细胞毒性实验 | 第21页 |
| 2.2.6 载药复合物的细胞摄取及细胞定位 | 第21-22页 |
| 2.2.7 ELISA酶联免疫吸附测定实验 | 第22-23页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.9 GLP-1 序列的基因改造及优化 | 第23-24页 |
| 2.2.10 pBlueScript ⅡSK（+）-8×MGLP1GFP质粒的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.11 酿酒酵母质粒表达载体的构建 | 第25页 |
| 2.2.12 重组蛋白在酿酒酵母孢子的表达以及孢子的纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.13 重组蛋白的Western blot检测及免疫荧光检测 | 第26-27页 |
| 2.2.14 模拟肠胃液处理酿酒酵母孢子给药体系 | 第27页 |
| 2.2.15 酿酒酵母孢子给药体系的体外活性检测 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-41页 |
| 3.1 酿酒酵母孢子载药复合物（dit1Δ-CpG ODN）的构建及表征 | 第29-33页 |
| 3.1.1 酿酒酵母孢子表面Zeta电位 | 第29页 |
| 3.1.2 酿酒酵母孢子载药复合物的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.3 载药复合物稳定性及装载效率检测 | 第30-31页 |
| 3.1.4 紫外光谱验证载药复合物的构建 | 第31-32页 |
| 3.1.5 凝胶阻滞法验证载药复合物的构建 | 第32-33页 |
| 3.2 dit1Δ孢子的生物相容性以及与dit1Δ-CpG ODN生物活性比较 | 第33-36页 |
| 3.2.1 dit1Δ孢子的生物相容性 | 第33页 |
| 3.2.2 巨噬细胞对dit1Δ-CpG ODN载药复合物的摄取 | 第33-34页 |
| 3.2.3 dit1Δ-CpG ODN载药复合物在巨噬细胞内的定位 | 第34-35页 |
| 3.2.4 dit1Δ孢子体外免疫活性评价 | 第35-36页 |
| 3.2.5 dit1Δ-CpG ODN载药复合物体外免疫活性评价 | 第36页 |
| 3.3 酿酒酵母孢子表达载体的构建 | 第36-41页 |
| 3.3.1 GLP-1 序列的基因改造及优化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 pRS424-TEFpr-8×MGLP1GFP质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.3 Western blot检测 8×MGLP-1 重组蛋白的表达 | 第38页 |
| 3.3.4 重组蛋白在酿酒酵母孢子的定位 | 第38-39页 |
| 3.3.5 酿酒酵母孢子装载 8×MGLP-1 体系的细胞活性检测 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 主要结论 | 第41页 |
| 展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
