摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
第一章 绪论 | 第12-26页 |
1.1 我国淡水鱼资源现状 | 第12-13页 |
1.2 草鱼简介 | 第13页 |
1.3 淡水鱼死后肌肉组织的变化 | 第13-14页 |
1.3.1 淡水鱼死后早期的生化变化 | 第13页 |
1.3.2 死后僵硬 | 第13-14页 |
1.3.3 解僵与自溶 | 第14页 |
1.3.4 腐败 | 第14页 |
1.4 蛋白质组学的定义及研究内容 | 第14-22页 |
1.4.1 蛋白质组学的定义 | 第14-15页 |
1.4.2 蛋白质组学的研究基础 | 第15页 |
1.4.3 蛋白质组学的研究内容 | 第15-16页 |
1.4.4 蛋白质组学的研究方法和核心技术 | 第16-22页 |
1.4.4.1 双向电泳凝胶技术 | 第16-20页 |
1.4.4.2 质谱技术 | 第20-21页 |
1.4.4.3 生物信息学 | 第21-22页 |
1.5 蛋白质组学在生物宰后贮藏过程中的变化的研究 | 第22-23页 |
1.6 本课题的研究目的、意义和内容 | 第23-26页 |
1.6.1 本课题的研究意义 | 第23-24页 |
1.6.2 本课题的研究目的 | 第24-25页 |
1.6.3 本课题的研究内容 | 第25-26页 |
第二章 冷藏过程中草鱼肌原纤维蛋白的变化规律 | 第26-44页 |
2.1 引言 | 第26-27页 |
2.2 实验材料与设备 | 第27-29页 |
2.2.1 主要材料与试剂 | 第27-28页 |
2.2.2 实验仪器 | 第28-29页 |
2.3 实验方法 | 第29-32页 |
2.3.1 不同冷藏时间点肌原纤维蛋白样品的制备 | 第29页 |
2.3.2 肌原纤维蛋白SDS-PAGE分析 | 第29页 |
2.3.3 巯基与二硫键含量的变化分析 | 第29-30页 |
2.3.4 反相液相色谱法PRLC测定蛋白质表面疏水性的变化 | 第30页 |
2.3.5 热力学性质变化分析 | 第30页 |
2.3.6 蛋白质显微结构的变化分析 | 第30-31页 |
2.3.7 二级结构的变化分析 | 第31页 |
2.3.8 肌球蛋白Ca~(2+)-ATPase活性的变化分析 | 第31-32页 |
2.3.8.1 肌动球蛋白的提取 | 第31页 |
2.3.8.2 酶活的测定 | 第31-32页 |
2.4 实验结果与分析 | 第32-42页 |
2.4.1 肌原纤维蛋白SDS-PAGE分析 | 第32-34页 |
2.4.2 热力学性质变化分析 | 第34-35页 |
2.4.3 蛋白质显微结构的变化分析 | 第35-36页 |
2.4.4 表面疏水性的变化分析 | 第36-37页 |
2.4.5 二级结构的变化分析 | 第37-39页 |
2.4.6 Ca~(2+)-ATPase活性的变化分析 | 第39-40页 |
2.4.7 疏基与二硫键含量的变化分析 | 第40-42页 |
2.5 讨论 | 第42-43页 |
2.6 本章小结 | 第43-44页 |
第三章 冷藏过程中草鱼肌肉蛋白质组学研究 | 第44-77页 |
3.1 引言 | 第44页 |
3.2 实验材料与设备 | 第44-47页 |
3.2.1 主要材料与试剂 | 第44-46页 |
3.2.2 实验仪器 | 第46-47页 |
3.3 实验方法 | 第47-58页 |
3.3.1 双向电泳主要试剂的配制 | 第47-50页 |
3.3.2 蛋白质的提纯和定量 | 第50-52页 |
3.3.2.1 关键时间点草鱼样品的制备 | 第50页 |
3.3.2.2 草鱼肉组织的研磨 | 第50页 |
3.3.2.3 蛋白质的提取 | 第50-51页 |
3.3.2.4 蛋白质的纯化 | 第51页 |
3.3.2.5 蛋白质的定量 | 第51-52页 |
3.3.3 双向电泳 | 第52-55页 |
3.3.3.1 第一向等点聚焦(IEF电泳) | 第52-53页 |
3.3.3.2 二向凝胶的灌制 | 第53页 |
3.3.3.3 胶条的平衡 | 第53页 |
3.3.3.4 第二向SDS-PAGE凝胶电泳 | 第53-54页 |
3.3.3.5 染色 | 第54-55页 |
3.3.3.6 图像的扫描与分析 | 第55页 |
3.3.4 差异蛋白质的质谱鉴定 | 第55-58页 |
3.3.4.1 质谱前准备 | 第55-57页 |
3.3.4.2 质谱检测 | 第57页 |
3.3.4.3 数据库检索 | 第57-58页 |
3.4 实验结果与分析 | 第58-75页 |
3.4.1 应用SDS-PAGE技术分析草鱼肌肉总蛋白的变化 | 第58-59页 |
3.4.2 2-DE双向电泳技术对草鱼肌肉的差异蛋白分析 | 第59-68页 |
3.4.2.1 冷藏过程中草鱼肌肉差异蛋白点 | 第59-61页 |
3.4.2.2 质谱鉴定待切点的选择 | 第61-68页 |
3.4.3 冷藏过程中草鱼肌肉差异蛋白的质谱鉴定及功能分析 | 第68-75页 |
3.5 讨论 | 第75-76页 |
3.6 本章小结 | 第76-77页 |
第四章 主要结论与创新点 | 第77-79页 |
4.1 本研究的主要结论 | 第77-78页 |
4.2 本研究的创新点和意义 | 第78页 |
4.3 今后努力和研究的方向 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-85页 |
致谢 | 第85-86页 |
附录A(攻读学位期间所发表的论文) | 第86-87页 |
附录B(部分蛋白MALDI TOF&TOF/TOF肽指纹图谱) | 第87-93页 |