| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-32页 |
| 1.1 概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 甜叶菊 | 第11页 |
| 1.1.2 甜菊糖苷及其结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 甜菊糖苷的性质 | 第12-13页 |
| 1.1.4 甜菊糖苷的应用 | 第13-15页 |
| 1.1.5 甜菊糖苷的安全性 | 第15-16页 |
| 1.2 甜菊糖苷（SGs）的生物合成 | 第16-19页 |
| 1.3 甜菊糖苷的生物转化 | 第19-23页 |
| 1.3.1 葡糖基转移酶法 | 第19-21页 |
| 1.3.2 β‐呋喃果糖苷酶法(FFase法) | 第21页 |
| 1.3.3 半乳糖苷酶法 | 第21-22页 |
| 1.3.4 微生物转化法 | 第22页 |
| 1.3.5 其它生物转化方法 | 第22-23页 |
| 1.4 实验底物与产物简介 | 第23-24页 |
| 1.5 选题的背景及意义 | 第24-25页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二章 葡萄糖转移酶的真核表达 | 第32-54页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第33页 |
| 2.2.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.2.3 工具酶和相关试剂 | 第34页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-47页 |
| 2.3.1 葡萄糖基转移酶EUGT11基因的获得 | 第35-37页 |
| 2.3.2 基因合成的设计 | 第37-38页 |
| 2.3.3 双酶切体系的建立 | 第38页 |
| 2.3.4 胶回收酶切片段 | 第38页 |
| 2.3.5 胶回收产物与目的的基因片段连接 | 第38-39页 |
| 2.3.6 制备大肠杆菌感受态 | 第39-40页 |
| 2.3.7 重组穿梭质粒在大肠杆菌中的转化 | 第40页 |
| 2.3.8 菌落PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.9 碱裂解法提取大肠质粒 | 第41-42页 |
| 2.3.10 酿酒酵母感受态制备 | 第42-43页 |
| 2.3.11 重组质粒在酿酒酵母中的转化 | 第43页 |
| 2.3.12 玻璃珠震荡法提取酿酒酵母质粒 | 第43-44页 |
| 2.3.13 静息细胞制备 | 第44页 |
| 2.3.14 高压匀浆破碎制备粗酶液 | 第44页 |
| 2.3.15 葡萄糖转移酶的SDS‐PAGE分析 | 第44页 |
| 2.3.16 Western blot分析 | 第44-45页 |
| 2.3.17 高效液相检测全细胞与酶液活力 | 第45-47页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第47-51页 |
| 2.4.1 葡萄糖转移酶真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.4.2 验证重组质粒 | 第48-49页 |
| 2.4.3 重组质粒成功导入酿酒酵母 | 第49页 |
| 2.4.4 表达产物SDS‐PAGE分析 | 第49-50页 |
| 2.4.5 Western blot结果分析 | 第50-51页 |
| 2.4.6 高效液相分析结果 | 第51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| 第三章 葡萄糖转移酶的原核表达 | 第54-68页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料 | 第54-56页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第54页 |
| 3.2.2 培养基 | 第54-55页 |
| 3.2.3 主要工具酶和试剂 | 第55页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第55-56页 |
| 3.3 实验步骤 | 第56-61页 |
| 3.3.1 E.coli JM109/ pVTU260‐EUGT11菌液的制备 | 第56页 |
| 3.3.2 重组质粒的提取 | 第56页 |
| 3.3.3 双酶切体系的建立 | 第56-57页 |
| 3.3.4 制备E. coli BL21(DE3)Codon Plus‐RIL感受态 | 第57页 |
| 3.3.5 重组质粒的转化 | 第57-58页 |
| 3.3.6 菌落PCR | 第58-59页 |
| 3.3.7 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第59页 |
| 3.3.8 基因的诱导表达 | 第59页 |
| 3.3.9 检测不同温度诱导条件的菌体量 | 第59-60页 |
| 3.3.10 静息细胞制备 | 第60页 |
| 3.3.11 超声破碎制备粗酶液 | 第60页 |
| 3.3.12 筛选活力较高的菌株 | 第60页 |
| 3.3.13 葡萄糖转移酶的SDS‐PAGE分析 | 第60-61页 |
| 3.3.14 检测不同温度诱导条件的酶活 | 第61页 |
| 3.3.15 分析方法 | 第61页 |
| 3.4 实验结果 | 第61-66页 |
| 3.4.1 双酶切结果 | 第61-62页 |
| 3.4.2 重组质粒的构建 | 第62页 |
| 3.4.3 重组质粒验证 | 第62-63页 |
| 3.4.4 粗酶液和冻干粉的制备 | 第63-64页 |
| 3.4.5 阳性菌落中筛选活力较高菌株 | 第64-65页 |
| 3.4.6 葡萄糖转移酶的蛋白表达与初步优化 | 第65-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第四章 葡萄糖转移酶催化条件优化 | 第68-81页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 材料 | 第68-69页 |
| 4.2.1 菌株与培养基 | 第68-69页 |
| 4.2.2 化学试剂与主要仪器 | 第69页 |
| 4.3 实验步骤 | 第69-71页 |
| 4.3.1 葡萄糖基转移酶静息细胞的制备 | 第69页 |
| 4.3.2 反应体系pH对静息细胞催化性能的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.3 温度对静息细胞催化性能的影响 | 第70页 |
| 4.3.4 金属离子对静息细胞催化性能的影响 | 第70页 |
| 4.3.5 底物比例对静息细胞催化性能的影响 | 第70页 |
| 4.3.6 葡萄糖基转移酶静息细胞催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷D的进程 | 第70-71页 |
| 4.3.7 分析及计算方法 | 第71页 |
| 4.3.8 细胞活力的定义 | 第71页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第71-78页 |
| 4.4.1 反应体系pH对静息细胞催化性能的影响 | 第71-73页 |
| 4.4.2 温度对静息细胞催化性能的影响 | 第73-75页 |
| 4.4.3 金属离子对静息细胞催化性能的影响 | 第75-76页 |
| 4.4.4 底物浓度比例对静息细胞催化性能的影响 | 第76-77页 |
| 4.4.5 葡萄糖基转移酶全细胞催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷D的进程 | 第77-78页 |
| 4.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 第五章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 5.1 结论 | 第81页 |
| 5.2 展望 | 第81-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
