| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 纳豆功能简介 | 第16-18页 |
| 1.1.1 防治骨质疏松 | 第16-17页 |
| 1.1.2 溶血栓 | 第17页 |
| 1.1.3 抗氧化 | 第17页 |
| 1.1.4 抗菌作用 | 第17页 |
| 1.1.5 抗癌作用 | 第17页 |
| 1.1.6 促消化、调节肠道 | 第17-18页 |
| 1.1.7 降血压 | 第18页 |
| 1.1.8 其他功能 | 第18页 |
| 1.2 纳豆芽孢杆菌 | 第18-19页 |
| 1.3 纳豆芽孢杆菌发酵产氨 | 第19页 |
| 1.4 脲酶研究进展 | 第19-23页 |
| 1.4.1 脲酶简介 | 第19-21页 |
| 1.4.2 脲酶催化生成氨机制 | 第21-22页 |
| 1.4.3 脲酶的合成分泌 | 第22-23页 |
| 1.5 基因敲除技术 | 第23-26页 |
| 1.5.1 敲除载体的构建 | 第24页 |
| 1.5.2 转化方法 | 第24-26页 |
| 1.5.3 同源重组的筛选与鉴定 | 第26页 |
| 1.6 研究依据、内容 | 第26-28页 |
| 1.6.1 研究依据 | 第26-27页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 纳豆芽孢杆菌脲酶酶学特性的研究 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验主要培养基及溶液 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第30-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 培养方法 | 第32页 |
| 2.2.2 纳豆芽孢杆菌生长曲线 | 第32页 |
| 2.2.3 培养条件对纳豆芽孢杆菌脲酶产量的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.4 粗酶液的提取 | 第33页 |
| 2.2.5 粗酶蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2.2.7 脲酶活性测定 | 第35页 |
| 2.2.8 温度对脲酶酶活的影响 | 第35页 |
| 2.2.9 金属离子对脲酶活性的影响 | 第35页 |
| 2.2.10 金属离子对脲酶活性的影响 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.3.1 纳豆芽孢杆菌（CGMCC No. 2801）生长曲线 | 第35-36页 |
| 2.3.2 不同培养条件对纳豆芽孢杆菌脲酶产量的影响 | 第36-41页 |
| 2.3.3 温度对脲酶酶活的影响 | 第41页 |
| 2.3.4 pH对脲酶酶活的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.5 金属离子对脲酶活性的影响 | 第42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 纳豆芽孢杆菌ure缺失载体的构建 | 第44-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要实验培养基及溶液 | 第45-46页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-53页 |
| 3.2.1 纳豆芽孢杆菌DNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.2.2 基因组DNA的检测 | 第47页 |
| 3.2.3 ure上下游扩增 | 第47-49页 |
| 3.2.4 ure上下游同源序列PCR产物纯化 | 第49页 |
| 3.2.5 ure上下游连接pEASY-T1多克隆载体 | 第49-50页 |
| 3.2.6 E.coli DH5α 感受态的制备（CaCl2） | 第50页 |
| 3.2.7 连接产物转化E.coli DH5α 感受态 | 第50-51页 |
| 3.2.8 质粒提取 | 第51-52页 |
| 3.2.9 pKSV7:ure14载体构建 | 第52-53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 3.3.1 纳豆芽孢杆菌DNA提取 | 第54页 |
| 3.3.2 ure上下游同源序列ure12、ure34的扩增 | 第54-56页 |
| 3.3.3 pKSV7:ure14载体构建 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌168和纳豆芽孢杆菌转化 | 第58-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第58-61页 |
| 4.1.1 实验菌株与质粒 | 第58页 |
| 4.1.2 实验主要试剂 | 第58-59页 |
| 4.1.3 实验主要培养基及溶液 | 第59-60页 |
| 4.1.4 实验主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-64页 |
| 4.2.1 电转化感受态制备 | 第61页 |
| 4.2.2 电转化 | 第61-62页 |
| 4.2.3 原生质体感受态制备 | 第62页 |
| 4.2.4 原生质体转化 | 第62-63页 |
| 4.2.5 阳性转化子筛选 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-67页 |
| 4.3.1 电转化 | 第64-65页 |
| 4.3.2 原生质体转化 | 第65-67页 |
| 4.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第80页 |
