| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1.引言 | 第11-22页 |
| 1.1 研究目的及意义 | 第11-13页 |
| 1.1.1 淀粉及淀粉酶 | 第11-12页 |
| 1.1.2 α-淀粉酶的应用 | 第12页 |
| 1.1.3 本课题研究目的及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外提高酶稳定性研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 分子改造-非理性设计 | 第13页 |
| 1.2.2 分子改造-理性设计 | 第13-14页 |
| 1.2.3 化学方法 | 第14-15页 |
| 1.2.4 物理方法 | 第15页 |
| 1.3 低温淀粉酶研究存在的问题 | 第15-21页 |
| 1.3.1 低温微生物 | 第15-16页 |
| 1.3.2 低温酶的冷适应性机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 低温酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.4 低温淀粉酶的特点 | 第19页 |
| 1.3.5 低温淀粉酶国内外研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3.6 低温淀粉酶的应用前景 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的主要内容 | 第21-22页 |
| 2.基于PoPMusic提高低温α-淀粉酶热稳定性 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 酶、引物及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23页 |
| 2.1.5 实验相关溶液 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 基于PoPMusic确定突变位点 | 第25页 |
| 2.2.2 模板质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 突变质粒构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 大肠杆菌转化 | 第28页 |
| 2.2.5 阳性克隆的鉴定与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.6 低温淀粉酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第29页 |
| 2.2.7 低温淀粉酶的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.8 蛋白质浓度测定 | 第30页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第30页 |
| 2.2.10 低温淀粉酶AHA活力的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.11 野生型AHA及其突变体最适温度的测定 | 第31页 |
| 2.2.12 野生型AHA及其突变体最适pH的测定 | 第31页 |
| 2.2.13 野生型AHA及其突变体热稳定性的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.14 野生型AHA及其突变体催化动力学参数的测定 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.3.1 野生型AHA的异源表达及酶学性质分析 | 第32-34页 |
| 2.3.2 突变位点的选择 | 第34页 |
| 2.3.3 单点突变体的酶活力初步筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.4 野生型AHA及其突变体的热稳定性 | 第35-36页 |
| 2.3.5 野生型AHA及其突变体的最适温度 | 第36-37页 |
| 2.3.6 野生型AHA及其突变体的最适pH | 第37页 |
| 2.3.7 野生型AHA及其突变体的催化动力学参数 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 3.基于分子动力学模拟提高低温α-淀粉酶热稳定性 | 第40-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 实验主要仪器 | 第40页 |
| 3.1.3 酶、引物及生化试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.4 培养基 | 第41页 |
| 3.1.5 实验相关溶液 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 基于分子动力学模拟确定突变位点 | 第41页 |
| 3.2.2 模板质粒提取 | 第41页 |
| 3.2.3 突变质粒构建 | 第41页 |
| 3.2.4 大肠杆菌转化 | 第41-42页 |
| 3.2.5 低温淀粉酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第42页 |
| 3.2.6 低温淀粉酶的纯化 | 第42页 |
| 3.2.7 纯化后低温淀粉酶质量测定 | 第42页 |
| 3.2.8 野生型AHA及其突变体酶活力的测定 | 第42页 |
| 3.2.9 野生型AHA及其突变体最适温度的测定 | 第42页 |
| 3.2.10 野生型AHA及其突变体最适pH的测定 | 第42页 |
| 3.2.11 野生型AHA及其突变体热稳定性的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.12 野生型AHA及其突变体催化动力学参数的测定 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 3.3.1 突变位点的选择 | 第43-44页 |
| 3.3.2 单点突变体酶活力初步筛选 | 第44页 |
| 3.3.3 野生型AHA及其突变体的热稳定性 | 第44-45页 |
| 3.3.4 野生型AHA及其突变体的最适温度 | 第45-46页 |
| 3.3.5 野生型AHA及其突变体的最适pH | 第46-47页 |
| 3.3.6 野生型AHA及其突变体的催化动力学参数 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 4.基于协同作用提高低温α-淀粉酶热稳定性 | 第50-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第50页 |
| 4.1.2 实验主要仪器 | 第50页 |
| 4.1.3 酶、引物及生化试剂 | 第50页 |
| 4.1.4 培养基 | 第50页 |
| 4.1.5 实验相关溶液 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 复合突变体的确定 | 第50-51页 |
| 4.2.2 模板质粒提取 | 第51页 |
| 4.2.3 突变质粒构建 | 第51页 |
| 4.2.4 大肠杆菌转化 | 第51页 |
| 4.2.5 低温淀粉酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第51页 |
| 4.2.6 低温淀粉酶的纯化 | 第51页 |
| 4.2.7 纯化低温淀粉酶质量测定 | 第51页 |
| 4.2.8 野生型AHA及其突变体酶活力的测定 | 第51页 |
| 4.2.9 野生型AHA及其突变体最适温度的测定 | 第51页 |
| 4.2.10 野生型AHA及其突变体最适pH的测定 | 第51-52页 |
| 4.2.11 野生型AHA及其突变体热稳定性的测定 | 第52页 |
| 4.2.12 野生型AHA及其突变体动力学参数的测定 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-56页 |
| 4.3.1 复合突变体的确定 | 第52页 |
| 4.3.2 组合突变体的热稳定性 | 第52-53页 |
| 4.3.3 组合突变体最适温度和最适pH | 第53-55页 |
| 4.3.4 组合突变体的催化动力学参数 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 5.主要结论与展望 | 第57-59页 |
| 5.1 主要结论 | 第57页 |
| 5.2 展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 作者简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 详细摘要 | 第66-67页 |
