| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-43页 |
| 1.1 脂环酸芽孢杆菌简介 | 第15-19页 |
| 1.1.1 发现历史及分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 主要特征 | 第16-18页 |
| 1.1.3 分布 | 第18-19页 |
| 1.2 脂环酸芽孢杆菌的危害 | 第19-22页 |
| 1.2.1 对果汁工业的影响 | 第19-20页 |
| 1.2.2 恶臭物质的产生 | 第20-22页 |
| 1.3 食品中愈创木酚的产生途径 | 第22-27页 |
| 1.3.1 微生物代谢 | 第22-26页 |
| 1.3.2 热裂解作用 | 第26页 |
| 1.3.3 儿茶酚甲基化作用 | 第26-27页 |
| 1.4 脂环酸芽孢杆菌及其代谢产物检测方法 | 第27-30页 |
| 1.4.1 脂环酸芽孢杆菌常规检测 | 第27页 |
| 1.4.2 脂环酸芽孢杆菌快速检测 | 第27-30页 |
| 1.4.3 代谢产物检测 | 第30页 |
| 1.5 脂环酸芽孢杆菌控制方法 | 第30-40页 |
| 1.5.1 原料果中脂环酸芽孢杆菌的控制 | 第31-34页 |
| 1.5.2 非传统杀菌技术对脂环酸芽孢杆菌的控制 | 第34-37页 |
| 1.5.3 天然化学物质或防腐剂对脂环酸芽孢杆菌的控制 | 第37-40页 |
| 1.6 研究背景、意义及主要内容 | 第40-43页 |
| 1.6.1 研究背景及意义 | 第40-41页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第41-42页 |
| 1.6.3 技术路线图 | 第42-43页 |
| 第二章 脂环酸芽孢杆菌产愈创木酚前体物及代谢途径解析 | 第43-57页 |
| 2.1 材料、试剂与设备 | 第43-44页 |
| 2.1.1 试验菌株及培养基 | 第43页 |
| 2.1.2 试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第43-44页 |
| 2.2 试验方法 | 第44-46页 |
| 2.2.1 A. acidoterrestris产愈创木酚前体物的确定 | 第44页 |
| 2.2.2 A. acidoterrestris DSM 3923生长细胞对香草酸和香草醛的消耗 | 第44页 |
| 2.2.3 静息细胞的制备 | 第44-45页 |
| 2.2.4 A. acidoterrestris DSM 3923静息细胞对香草酸和香草醛的消耗 | 第45页 |
| 2.2.5 粗酶液的制备 | 第45页 |
| 2.2.6 粗酶液对香草酸和香草醛的转化 | 第45页 |
| 2.2.7 酶活分析 | 第45-46页 |
| 2.2.8 检测方法 | 第46页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第46-56页 |
| 2.3.1 方法学验证 | 第46-47页 |
| 2.3.2 A. acidoterrestris产愈创木酚前体物的确定 | 第47-49页 |
| 2.3.3 A. acidoterrestris DSM 3923生长与愈创木酚产生的关系 | 第49-50页 |
| 2.3.4 A. acidoterrestris DSM 3923静息细胞对香草酸和香草醛的转化 | 第50-52页 |
| 2.3.5 粗酶液对香草酸和香草醛的转化 | 第52-54页 |
| 2.3.6 酶活分析 | 第54页 |
| 2.3.7 A. acidoterrestris DSM 3923产愈创木酚代谢途径分析 | 第54-56页 |
| 2.4 小结 | 第56-57页 |
| 第三章 香草酸脱羧酶的提取、初步纯化及性质研究 | 第57-72页 |
| 3.1 材料、试剂与设备 | 第57-58页 |
| 3.1.1 试验菌株及培养基 | 第57页 |
| 3.1.2 试剂 | 第57页 |
| 3.1.3 主要仪器及设备 | 第57-58页 |
| 3.2 试验方法 | 第58-60页 |
| 3.2.1 菌株活化及种子液的制备 | 第58页 |
| 3.2.2 菌株生长曲线绘制及不同生长阶段香草酸脱羧酶活性测定 | 第58页 |
| 3.2.3 四种不同细胞破碎方法 | 第58页 |
| 3.2.4 电镜试验 | 第58页 |
| 3.2.5 可溶性蛋白含量分析及香草酸脱羧酶活性测定 | 第58-59页 |
| 3.2.6 超声波提取单因素试验 | 第59页 |
| 3.2.7 超声波提取响应面优化试验设计 | 第59页 |
| 3.2.8 硫酸铵分级沉淀和透析 | 第59-60页 |
| 3.2.9 pH值对香草酸脱羧酶活性及稳定性的影响 | 第60页 |
| 3.2.10 温度对香草酸脱羧酶活性及稳定性的影响 | 第60页 |
| 3.2.11 金属离子对香草酸脱羧酶活性的影响 | 第60页 |
| 3.2.12 多酚物质对香草酸脱羧酶活性的影响 | 第60页 |
| 3.2.13 统计分析 | 第60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-71页 |
| 3.3.1 菌株生长曲线绘制及不同生长阶段酶活的变化规律 | 第60-61页 |
| 3.3.2 不同细胞破碎方法比较 | 第61-63页 |
| 3.3.3 超声波提取单因素试验结果 | 第63-65页 |
| 3.3.4 超声波提取响应面优化试验结果分析 | 第65-68页 |
| 3.3.5 硫酸铵分级沉淀条件分析 | 第68页 |
| 3.3.6 pH值对香草酸脱羧酶活性及稳定性的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.7 温度对香草酸脱羧酶活性及稳定性的影响 | 第69页 |
| 3.3.8 金属离子对香草酸脱羧酶活性的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.9 多酚物质对香草酸脱羧酶活性的抑制 | 第70-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-72页 |
| 第四章 脂环酸芽孢杆菌vdc基因的扩增及序列分析 | 第72-83页 |
| 4.1 材料、试剂与设备 | 第72-73页 |
| 4.1.1 试验菌株及培养基 | 第72页 |
| 4.1.2 试剂 | 第72页 |
| 4.1.3 主要仪器及设备 | 第72-73页 |
| 4.2 试验方法 | 第73-75页 |
| 4.2.1 基因组DNA提取 | 第73页 |
| 4.2.2 A. acidoterrestris DSM 3923中vdc基因簇的扩增和测序 | 第73-74页 |
| 4.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第74页 |
| 4.2.4 脂环酸芽孢杆菌vdcC基因的扩增 | 第74页 |
| 4.2.5 脂环酸芽孢杆菌产愈创木酚能力测定 | 第74-75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-82页 |
| 4.3.1 A. acidoterrestris DSM 3923 vdc基因簇扩增及测序 | 第75页 |
| 4.3.2 vdc基因簇序列分析 | 第75-78页 |
| 4.3.3 脂环酸芽孢杆菌愈创木酚的产生及部分vdcC基因的扩增 | 第78-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 基于vdcC基因的苹果汁中脂环酸芽孢杆菌荧光定量PCR检测 | 第83-97页 |
| 5.1 材料、试剂与设备 | 第83-85页 |
| 5.1.1 试验菌株及培养基 | 第83-84页 |
| 5.1.2 试剂 | 第84-85页 |
| 5.1.3 主要仪器及设备 | 第85页 |
| 5.2 试验方法 | 第85-88页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第85页 |
| 5.2.2 模板制备 | 第85页 |
| 5.2.3 SYBR Green I实时荧光定量PCR体系建立 | 第85-86页 |
| 5.2.4 标准曲线建立及结果判读 | 第86页 |
| 5.2.5 特异性及灵敏度评价 | 第86页 |
| 5.2.6 重复性试验 | 第86页 |
| 5.2.7 苹果汁加标样品中A. acidoterrestris的检测 | 第86-87页 |
| 5.2.8 人工污染苹果汁样品的制备 | 第87页 |
| 5.2.9 苹果汁中愈创木酚的GC-MS检测 | 第87-88页 |
| 5.3 结果与分析 | 第88-95页 |
| 5.3.1 SYBR Green I实时荧光定量PCR引物设计 | 第88-89页 |
| 5.3.2 检测体系特异性评价 | 第89-91页 |
| 5.3.3 检测体系标准曲线的建立及灵敏度评价 | 第91-92页 |
| 5.3.4 检测方法的重复性评价 | 第92-93页 |
| 5.3.5 加标苹果汁样品中A. acidoterrestris的检测 | 第93页 |
| 5.3.6 GC-MS检测苹果汁中愈创木酚的方法学考察 | 第93-94页 |
| 5.3.7 人工污染苹果汁样品中A. acidoterrestris及愈创木酚的检测 | 第94-95页 |
| 5.4 小结 | 第95-97页 |
| 第六章 二氧化氯结合超声波和振荡法去除苹果表面的脂环酸芽孢杆菌 | 第97-108页 |
| 6.1 材料、试剂与设备 | 第98页 |
| 6.1.1 试验菌株、培养基及材料 | 第98页 |
| 6.1.2 试剂 | 第98页 |
| 6.1.3 主要仪器及设备 | 第98页 |
| 6.2 试验方法 | 第98-100页 |
| 6.2.1 芽孢悬液的制备 | 第98-99页 |
| 6.2.2 苹果表面接种处理 | 第99页 |
| 6.2.3 二氧化氯溶液的配制 | 第99页 |
| 6.2.4 苹果表面和水溶液中芽孢的处理 | 第99页 |
| 6.2.5 统计分析 | 第99-100页 |
| 6.3 结果与分析 | 第100-106页 |
| 6.3.1 二氧化氯单独处理 | 第100-101页 |
| 6.3.2 超声波单独处理及与二氧化氯联合作用 | 第101-103页 |
| 6.3.3 振荡单独处理及与二氧化氯联合作用 | 第103-104页 |
| 6.3.4 pH值对A. acidoterrestris芽孢去除的影响 | 第104-106页 |
| 6.3.5 二氧化氯与振荡相结合对苹果表面A. acidoterrestris芽孢的去除 | 第106页 |
| 6.4 小结 | 第106-108页 |
| 第七章 果汁中常用防腐剂对脂环酸芽孢杆菌生长及愈创木酚产生的控制 | 第108-119页 |
| 7.1 材料、试剂与设备 | 第109页 |
| 7.1.1 试验菌株与材料 | 第109页 |
| 7.1.2 试剂 | 第109页 |
| 7.1.3 主要仪器及设备 | 第109页 |
| 7.2 试验方法 | 第109-111页 |
| 7.2.1 接种液的制备 | 第109页 |
| 7.2.2 防腐剂溶液的配制 | 第109页 |
| 7.2.3 防腐剂对培养基中菌体生长及愈创木酚产生的影响 | 第109-110页 |
| 7.2.4 防腐剂对苹果汁中菌体生长及愈创木酚产生的影响 | 第110-111页 |
| 7.2.5 苹果汁理化指标的测定 | 第111页 |
| 7.2.6 感官分析 | 第111页 |
| 7.3 结果与分析 | 第111-117页 |
| 7.3.1 防腐剂对培养基中菌体生长的抑制 | 第111-113页 |
| 7.3.2 防腐剂对培养基中菌体产愈创木酚的影响 | 第113-114页 |
| 7.3.3 防腐剂对苹果汁中菌体生长及代谢的影响 | 第114-117页 |
| 7.3.4 感官评价 | 第117页 |
| 7.4 小结 | 第117-119页 |
| 第八章 结论、创新点与展望 | 第119-122页 |
| 8.1 结论 | 第119-121页 |
| 8.2 创新点 | 第121页 |
| 8.3 展望 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-138页 |
| 附录 | 第138-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 作者简介 | 第145页 |
