| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-36页 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒 | 第14-19页 |
| 1.1.1 猪流行性腹泻病毒的流行 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PEDV基因和病毒结构 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PEDV编码蛋白 | 第16-18页 |
| 1.1.4 PEDV与宿主间的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.2 蛋白质组学研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2.1 蛋白质组研究常用方法 | 第20-23页 |
| 1.2.2 蛋白质组与病毒 | 第23页 |
| 1.3 PI3K/Akt信号通路与病毒感染 | 第23-28页 |
| 1.3.1 PI3K活化利于病毒入侵 | 第24-26页 |
| 1.3.2 PI3K活化促进mRNA成熟 | 第26页 |
| 1.3.3 PI3K活化延长细胞存活时间 | 第26-27页 |
| 1.3.4 PI3K活化促进病毒翻译 | 第27-28页 |
| 1.4 天然免疫因子BST-2 与病毒感染 | 第28-33页 |
| 1.4.1 BST-2 的结构与蛋白表达 | 第28-30页 |
| 1.4.2 BST-2 抑制病毒释放 | 第30-32页 |
| 1.4.3 BST-2 在信号传导中的作用 | 第32-33页 |
| 1.4.4 BST-2 维持细胞正常组织结构 | 第33页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第33-36页 |
| 第二章 PEDV感染Vero细胞的差异蛋白质鉴定 | 第36-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2.1.1 毒株和细胞 | 第36-37页 |
| 2.1.2 试剂与抗体 | 第37页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 2.1.4 PEDV感染与检测 | 第37页 |
| 2.1.5 双向凝胶电泳样品制备 | 第37-38页 |
| 2.1.6 双向凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.1.7 凝胶染色和图像扫描和质谱分析 | 第38页 |
| 2.1.8 Real-time PCR验证质谱分析结果 | 第38-40页 |
| 2.1.9 Western Blotting验证质谱分析结果 | 第40-41页 |
| 2.2 试验结果 | 第41-43页 |
| 2.2.1 PEDV感染细胞后病毒增殖检测 | 第41页 |
| 2.2.2 PEDV感染细胞后差异蛋白分析 | 第41-42页 |
| 2.2.3 Real-time PCR和Western Blotting验证分析 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-45页 |
| 2.4 小结 | 第45-50页 |
| 第三章 PEDV感染调控Vero细胞PI3K/Akt/GSK3信号通路的研究 | 第50-62页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 3.1.1 毒株和细胞 | 第51页 |
| 3.1.2 试剂与抗体 | 第51页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 3.1.4 病毒灭活与感染细胞 | 第51页 |
| 3.1.5 抑制剂毒性试验及抑制细胞试验 | 第51-52页 |
| 3.1.6 荧光定量及western blot分析 | 第52-53页 |
| 3.1.7 TCTD50测定 | 第53页 |
| 3.2 试验结果 | 第53-59页 |
| 3.2.1 PEDV感染激活Akt信号通路 | 第53页 |
| 3.2.2 UV灭活PEDV激活Akt早期磷酸化 | 第53-54页 |
| 3.2.3 抑制剂对细胞活性的影响 | 第54页 |
| 3.2.4 PEDV感染Vero细胞引起的Akt磷酸化受PI3K调控 | 第54-55页 |
| 3.2.5 PI3K/Akt信号通路抑制PEDV在Vero细胞中增殖 | 第55-56页 |
| 3.2.6 PEDV感染Vero细胞后磷酸化Akt下游GSK3信号分子 | 第56-57页 |
| 3.2.7 GSK3信号分子与抑制PEDV增殖 | 第57-59页 |
| 3.3 讨论 | 第59-60页 |
| 3.4 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 BST-2 抑制PEDV在Vero细胞内的复制与增殖 | 第62-84页 |
| 4.1 材料与方法 | 第63-70页 |
| 4.1.1 毒株、细胞和实验动物 | 第63页 |
| 4.1.2 试剂与抗体 | 第63页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 4.1.4 猪BST-2 全基因扩增 | 第63-66页 |
| 4.1.5 猪BST-2 基因载体构建与原核蛋白表达 | 第66-67页 |
| 4.1.6 猪BST-2 蛋白单克隆抗体的制备 | 第67-68页 |
| 4.1.7 猴BST-2 基因扩增与真核表达载体的构建 | 第68页 |
| 4.1.8 过表达BST-2 蛋白对PEDV增殖的影响 | 第68页 |
| 4.1.9 猴源BST-2 基因干扰 | 第68-69页 |
| 4.1.10 干扰猴源BST-2 基因对PEDV增殖的影响 | 第69页 |
| 4.1.11 猴源BST-2 基因不同区域对PEDV增殖的影响 | 第69页 |
| 4.1.12 猴源BST-2 基因激活NF-κB检测 | 第69-70页 |
| 4.2 试验结果 | 第70-81页 |
| 4.2.1 猪BST-2 全基因序列扩增 | 第70页 |
| 4.2.2 猪BST-2 蛋白的结构与功能预测分析 | 第70-73页 |
| 4.2.3 猪BST-2 基因组织表达谱分析 | 第73页 |
| 4.2.4 猪BST-2 基因启动子扩增与核心区检测 | 第73-74页 |
| 4.2.5 猪BST-2 基因表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 4.2.6 猪BST-2 蛋白原核表达与纯化 | 第75页 |
| 4.2.7 单克隆抗体的制备与特异性鉴定 | 第75-76页 |
| 4.2.8 猴BST-2 基因表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 4.2.9 过表达BST-2 蛋白抑制PEDV增殖 | 第77-79页 |
| 4.2.10 干扰Vero细胞中BST-2 的表达促进PEDV增殖 | 第79页 |
| 4.2.11 猴BST-2 基因不同区段抑制PEDV增殖 | 第79-81页 |
| 4.2.12 猴BST-2 基因激活NF-κB检测 | 第81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-83页 |
| 4.4 小结 | 第83-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 本研究创新点 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-104页 |
| 附录1 | 第104-105页 |
| 附录2 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
