| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 立题背景 | 第14-15页 |
| 1.2 细菌素的概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 细菌素的定义与分类 | 第15页 |
| 1.2.2 细菌素的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 发酵条件对乳酸菌细菌素产量的影响 | 第16-18页 |
| 1.3.1 培养基成分对细菌素产量的影响 | 第17页 |
| 1.3.2 培养条件对细菌素产量的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.3 有机溶剂对细菌素产量的影响 | 第18页 |
| 1.3.4 群体感应现象对细菌素产量的影响 | 第18页 |
| 1.4 群体感应简介 | 第18-20页 |
| 1.4.1 群体感应的发现 | 第18-19页 |
| 1.4.2 群体感应的定义及分类 | 第19-20页 |
| 1.5 AI-2 信号分子概述 | 第20-22页 |
| 1.5.1 AI-2 信号分子的生物合成途径 | 第20-21页 |
| 1.5.2 AI-2 信号分子生物活性的检测 | 第21页 |
| 1.5.3 AI-2 信号分子的调控作用研究现状 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.7 本研究采用的技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 工具酶、Marker和试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.1.3 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 常用溶液的配制 | 第27-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-44页 |
| 2.2.1 重组蛋白质Lux S和Pfs诱导表达条件的优化 | 第31-34页 |
| 2.2.2 重组蛋白质Lux S和Pfs存在形式的检测 | 第34-35页 |
| 2.2.3 重组蛋白质Lux S纯化条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.2.4 重组蛋白质Pfs纯化条件的优化 | 第36页 |
| 2.2.5 优化条件下重组蛋白质Lux S和Pfs的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.6 AI-2 体外合成条件的优化 | 第37-39页 |
| 2.2.7 优化条件下AI-2 的体外合成 | 第39页 |
| 2.2.8 植物乳杆菌培养上清液中AI-2 活性检测方法的优化 | 第39-40页 |
| 2.2.9 AI-2 添加对植物乳杆菌生长和细菌素合成的影响 | 第40-42页 |
| 2.2.10 AI-2 对细菌素结构基因pln EF转录水平的影响 | 第42-43页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-68页 |
| 3.1 重组蛋白质Lux S和Pfs诱导表达条件的优化 | 第44-49页 |
| 3.1.1 诱导培养基的确定 | 第44-45页 |
| 3.1.2 诱导温度的确定 | 第45-46页 |
| 3.1.3 诱导前菌体生物量的确定 | 第46-47页 |
| 3.1.4 诱导时间的确定 | 第47-48页 |
| 3.1.5 诱导剂IPTG浓度的确定 | 第48-49页 |
| 3.2 重组蛋白质Lux S和Pfs存在形式的检测 | 第49-50页 |
| 3.3 重组蛋白质Lux S纯化条件的优化 | 第50-52页 |
| 3.3.1 Native Elution Buffer咪唑浓度的优化 | 第50-51页 |
| 3.3.2 Native Elution Buffer p H的优化 | 第51页 |
| 3.3.3 结合缓冲液的选择 | 第51-52页 |
| 3.4 重组蛋白质Pfs纯化条件的优化 | 第52-53页 |
| 3.5 优化条件下重组蛋白质Lux S和Pfs的制备 | 第53-55页 |
| 3.5.1 重组蛋白质Lux S和Pfs的诱导表达及纯化 | 第53-54页 |
| 3.5.2 重组蛋白质Lux S和Pfs的透析、浓缩及定量 | 第54-55页 |
| 3.5.3 重组蛋白质Lux S和Pfs生物活性的检测 | 第55页 |
| 3.6 AI-2 体外合成条件的优化 | 第55-59页 |
| 3.6.1 AI-2 浓度测定标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| 3.6.2 AI-2 体外合成最适温度的确定 | 第56页 |
| 3.6.3 AI-2 体外合成最适p H的确定 | 第56-57页 |
| 3.6.4 AI-2 体外合成最佳酶浓度的确定 | 第57-58页 |
| 3.6.5 AI-2 体外合成孵育时间的确定 | 第58-59页 |
| 3.7 优化条件下AI-2 的体外合成 | 第59页 |
| 3.8 植物乳杆菌培养上清液中AI-2 活性检测方法的优化 | 第59-62页 |
| 3.8.1 植物乳杆菌纯培养上清液AI-2 的活性 | 第59-61页 |
| 3.8.2 培养上清液加样比例的确定 | 第61-62页 |
| 3.9 AI-2 添加对植物乳杆菌生长和细菌素合成的影响 | 第62-65页 |
| 3.9.1 添加AI-2 对植物乳杆菌KLDS1.0391生长的影响 | 第62-63页 |
| 3.9.2 AI-2 添加量对细菌素合成量的影响 | 第63页 |
| 3.9.3 植物乳杆菌KLDS1.0391生长过程中AI-2 活性的变化 | 第63-64页 |
| 3.9.4 细菌素合成动力学分析 | 第64-65页 |
| 3.10 AI-2 对细菌素结构基因pln EF转录水平的影响 | 第65-68页 |
| 3.10.1 引物的设计与验证 | 第65-66页 |
| 3.10.2 总RNA的提取 | 第66-67页 |
| 3.10.3 细菌素结构基因的差异表达 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 4.1 重组蛋白质Lux S和Pfs的诱导表达 | 第68-69页 |
| 4.2 重组蛋白质Lux S和Pfs的纯化 | 第69-70页 |
| 4.3 AI-2 体外合成 | 第70页 |
| 4.4 植物乳杆菌发酵上清液AI-2 活性的检测 | 第70-71页 |
| 4.5 AI-2 对植物乳杆菌KLDS1.0391细菌素合成的作用分析 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82页 |
