| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 展青霉素概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 展青霉素简介 | 第14页 |
| 1.1.2 PAT的产生及污染 | 第14-17页 |
| 1.1.3 PAT的毒性及限量标准 | 第17-18页 |
| 1.2 控制PAT污染的方法 | 第18-21页 |
| 1.2.1 物理方法 | 第19页 |
| 1.2.2 化学方法 | 第19-20页 |
| 1.2.3 生物防治 | 第20-21页 |
| 1.3 拮抗酵母体外清除PAT的研究 | 第21-22页 |
| 1.4 拮抗酵母降解PAT的机制 | 第22-24页 |
| 1.4.1 拮抗酵母降解PAT的生理机制 | 第22-23页 |
| 1.4.2 拮抗酵母生物降解PAT的产物及其毒性研究 | 第23页 |
| 1.4.3 拮抗酵母降解PAT的分子机制 | 第23-24页 |
| 1.5 本论文研究的目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 P.caribbica降解PAT产物的鉴定及其毒性分析 | 第26-42页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料和方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 材料及培养条件 | 第26-27页 |
| 2.2.2 PAT粗毒素溶液的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 P.caribbica对PAT的降解效果测定 | 第27页 |
| 2.2.4 PAT含量的TLC分析 | 第27-28页 |
| 2.2.5 PAT含量的HPLC分析 | 第28页 |
| 2.2.6 PAT降解产物的提取及鉴定 | 第28页 |
| 2.2.7 PAT降解产物的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 P.caribbica胞内酶的分级纯化 | 第29页 |
| 2.2.9 胞内酶对PAT的降解效果 | 第29页 |
| 2.2.10 PAT和降解产物对细胞活力分析 | 第29-30页 |
| 2.2.11 ROS测量 | 第30页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因的表达水平 | 第30-31页 |
| 2.2.13 蛋白免疫印记(WesternBlot)分析蛋白表达水平 | 第31页 |
| 2.2.14 统计分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-40页 |
| 2.3.1 P.caribbica对PAT的降解作用 | 第32-33页 |
| 2.3.2 不同组分的P.caribbica胞内酶对PAT的降解作用 | 第33-34页 |
| 2.3.3 P.carribbica降解PAT产物的鉴定 | 第34-36页 |
| 2.3.4 PAT降解中间产物ascladiol和终产物的毒性分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 PAT及其降解产物对Het-1a细胞内ROS累积的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.6 降解产物对Het-1a细胞增殖和细胞凋亡过程相关基因和蛋白的表达影响.. | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 基于iTRAQ蛋白质组学技术研究P.caribbica对PAT的应答调控 | 第42-53页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 菌株及培养条件 | 第42页 |
| 3.2.2 P.caribbica总蛋白提取 | 第42-43页 |
| 3.2.3 蛋白酶解和标记 | 第43页 |
| 3.2.4 高pH反相分离 | 第43-44页 |
| 3.2.5 低pHnano-HPLC-MS/MS分析 | 第44页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第44-45页 |
| 3.3 结果和分析 | 第45-50页 |
| 3.3.1 蛋白表达差异分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2 GO富集分析差异表达蛋白 | 第46-47页 |
| 3.3.3 KEGG富集分析差异表达蛋白 | 第47-48页 |
| 3.3.4 可能参与P.caribbica对PAT压力应答的蛋白 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 基于转录组学技术研究P.caribbica对PAT的应答调控 | 第53-68页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 菌株及培养条件 | 第53页 |
| 4.2.2 总RNA提取 | 第53-54页 |
| 4.2.3 转录组测序及组装 | 第54页 |
| 4.2.4 生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 4.2.5 cDNA的制备 | 第55页 |
| 4.2.6 半定量PCR(RT-PCR) | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-64页 |
| 4.3.1 测序数据统计 | 第56-57页 |
| 4.3.2 组装结果统计 | 第57页 |
| 4.3.3 unigene功能注释 | 第57-58页 |
| 4.3.4 DEGs筛选 | 第58页 |
| 4.3.5 DEGs功能注释和GO富集分析 | 第58-61页 |
| 4.3.6 KEGG富集分析DEGs | 第61-62页 |
| 4.3.7 显著上调表达基因功能分析 | 第62-63页 |
| 4.3.8 显著上调表达基因的功能分类及表达量验证 | 第63-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-68页 |
| 第五章 PcCRG1基因及其编码蛋白在P.caribbica降解PAT中的作用 | 第68-99页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第68-71页 |
| 5.2.1 载体与菌种 | 第68页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第68-69页 |
| 5.2.3 基本溶液的配制 | 第69页 |
| 5.2.4 主要仪器设备 | 第69-70页 |
| 5.2.5 引物设计 | 第70-71页 |
| 5.3 方法 | 第71-79页 |
| 5.3.1 PcCRG1蛋白保守基序分析 | 第71页 |
| 5.3.2 PcCRG1基因突变菌株的构建 | 第71-74页 |
| 5.3.3 PcCRG1过量表达及外源表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 5.3.4 PcCRG1外源表达载体的构建 | 第76-79页 |
| 5.3.5 PcCRG1突变和过表达P.caribbica菌株对PAT的降解作用 | 第79页 |
| 5.3.6 PcCRG1蛋白对PAT的降解作用 | 第79页 |
| 5.4 结果与分析 | 第79-97页 |
| 5.4.1 PcCRG1蛋白结构分析 | 第79-80页 |
| 5.4.2 PcCRG1敲除突变P.caribbica菌株的构建及对PAT的降解作用 | 第80-86页 |
| 5.4.3 PcCRG1过量表达菌株的构建及对PAT的降解作用 | 第86-92页 |
| 5.4.4 PcCRG1外源表达、产物纯化及其对PAT的降解作用 | 第92-97页 |
| 5.5 讨论 | 第97-99页 |
| 第六章 结论与展望 | 第99-100页 |
| 6.1 主要结论 | 第99页 |
| 6.2 本论文的创新点 | 第99-100页 |
| 6.3 展望 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 博士期间取得的科研成果 | 第122-124页 |
