| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-29页 |
| ·立题背景及意义 | 第10页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 简介 | 第10-13页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 生物学性状 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 的耐酸性和其主要毒力因子 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 的流行病学 | 第12-13页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 的预防 | 第13页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 的检测方法 | 第13-17页 |
| ·常规培养法 | 第14页 |
| ·免疫学检测方法 | 第14-15页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第15-17页 |
| ·环介导等温扩增（LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION，LAMP）方法 | 第17-28页 |
| ·LAMP 方法的概述 | 第17-18页 |
| ·LAMP 方法的特点 | 第18页 |
| ·LAMP 方法的引物设计 | 第18-20页 |
| ·LAMP 方法的基本原理 | 第20-24页 |
| ·LAMP 的反应体系 | 第24-25页 |
| ·LAMP 反应产物的检测方法 | 第25-26页 |
| ·LAMP 方法的应用 | 第26-28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-38页 |
| ·试验材料 | 第29-31页 |
| ·试验菌株 | 第29页 |
| ·仪器与设备 | 第29-30页 |
| ·主要培养基 | 第30-31页 |
| ·样品与生化试剂 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 的培养 | 第31页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 基因组 DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·引物设计、体系和操作程序 | 第32-33页 |
| ·LAMP 引物设计 | 第32-33页 |
| ·LAMP 和PCR 反应体系 | 第33页 |
| ·LAMP 和PCR 操作程序 | 第33页 |
| ·LAMP 反应条件优化 | 第33-34页 |
| ·引物对LAMP 反应的影响 | 第33-34页 |
| ·最适 M92+浓度选择 | 第34页 |
| ·dNTP 浓度的优化 | 第34页 |
| ·反应温度的优化 | 第34页 |
| ·BST 酶的优化 | 第34页 |
| ·反应时间的优化 | 第34页 |
| ·引物特异性试验 | 第34-35页 |
| ·LAMP 引物特异性试验 | 第34-35页 |
| ·PCR 引物特异性试验 | 第35页 |
| ·LAMP 扩增产物的分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物的可视结果分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物的电泳分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物酶切结果分析 | 第35页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 纯培养灵敏度的研究 | 第35-36页 |
| ·LAMP 检测大肠杆菌0157:H7 纯培养的灵敏度 | 第35页 |
| ·PCR 检测大肠杆菌0157:H7 纯培养的灵敏度 | 第35-36页 |
| ·人工污染牛肉中大肠杆菌0157:H7 基因组DNA 提取方法的比较 | 第36-37页 |
| ·普通热裂解法 | 第36页 |
| ·酚-氯仿抽提法 | 第36页 |
| ·试剂盒法（UNIQ-10 柱式细菌基因组DNA 抽提试剂盒） | 第36-37页 |
| ·人工污染牛肉的检出限 | 第37-38页 |
| ·LAMP 检测人工污染牛肉的检出限 | 第37页 |
| ·PCR 检测人工污染牛肉的检出限 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-50页 |
| ·LAMP 反应条件优化 | 第38-42页 |
| ·引物对LAMP 反应的影响 | 第38-39页 |
| ·最适M92+浓度选择 | 第39-40页 |
| ·dNTP 浓度的优化 | 第40-41页 |
| ·反应温度的优化 | 第41页 |
| ·BST 酶的优化 | 第41-42页 |
| ·反应时间的优化 | 第42页 |
| ·引物特异性试验 | 第42-44页 |
| ·LAMP 引物特异性试验 | 第42-43页 |
| ·PCR 引物特异性试验 | 第43-44页 |
| ·LAMP 扩增产物的分析 | 第44-46页 |
| ·LAMP 产物的可视结果分析 | 第44页 |
| ·LAMP 产物的电泳分析 | 第44-45页 |
| ·LAMP 产物酶切结果分析 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌0157:H7 纯培养灵敏度的研究 | 第46-47页 |
| ·LAMP 检测大肠杆菌0157:H7 纯培养的灵敏度 | 第46页 |
| ·PCR 检测大肠杆菌0157:H7 的灵敏度 | 第46-47页 |
| ·人工污染牛肉中大肠杆菌0157:H7 基因组DNA 提取方法的比较 | 第47-48页 |
| ·人工污染牛肉的检出限 | 第48-50页 |
| ·LAMP 检测人工污染牛肉的检出限 | 第48页 |
| ·PCR 检测人工污染牛肉的检出限 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·靶基因的选择 | 第50页 |
| ·引物的确定 | 第50页 |
| ·DNA 聚合酶 | 第50-51页 |
| ·污染防治措施 | 第51页 |
| ·LAMP 反应程序优化 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录A | 第60-61页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
