| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 猪链球菌的生物学基本特征 | 第13页 |
| 1.2 猪链球菌流行病学概况 | 第13-14页 |
| 1.3 猪链球菌的主要毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.3.1 荚膜 | 第14-15页 |
| 1.3.2 溶血素 | 第15页 |
| 1.3.3 溶菌酶释放蛋白 | 第15页 |
| 1.4 猪链球菌的致病机理 | 第15-17页 |
| 1.5 猪链球菌的荚膜合成基因簇 | 第17-18页 |
| 1.6 GntR转录调节家族 | 第18页 |
| 1.7 基因组上小范围的突变能有效影响细菌的表型 | 第18-19页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 耐血液杀伤猪链球菌株的筛选 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 菌株和血液样本 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22页 |
| 2.2.1 全血杀菌实验 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-29页 |
| 2.3.1 不同猪链球菌在人血中的生长模式 | 第22-26页 |
| 2.3.2 不同猪链球菌在人血中的存活率 | 第26-29页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 猪链球菌荚膜合成基因簇的分析 | 第30-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 菌株 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌株基因组的测序及拼接 | 第30页 |
| 3.2.2 菌株基因组的拼接 | 第30页 |
| 3.2.3 菌株基因组的注释 | 第30-31页 |
| 3.2.4 菌株基因组的SNP位点分析 | 第31页 |
| 3.2.5 菌株荚膜合成基因簇的共线性分析 | 第31页 |
| 3.2.6 蛋白序列分析 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.3.1 荚膜合成基因簇的结构分析 | 第31-33页 |
| 3.3.2 荚膜合成基因簇的SNP位点分析 | 第33-34页 |
| 3.3.3 GntR氨基酸水平上的分析 | 第34-35页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 猪链球菌2型gntR基因突变株的构建 | 第36-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第37-38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-47页 |
| 4.2.1 基因敲除载体的构建 | 第38-41页 |
| 4.2.2 基因缺失株的构建 | 第41-43页 |
| 4.2.3 基因置换载体的构建 | 第43-46页 |
| 4.2.4 基因置换株的构建 | 第46-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-53页 |
| 4.3.1 目的基因gntR上下游同源臂的扩增 | 第47-48页 |
| 4.3.2 基因敲除载体的鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.3 目的基因gntR的扩增(含上下游同源臂) | 第49-50页 |
| 4.3.4 基因置换载体的鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3.5 突变株的鉴定 | 第51-53页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 gntR基因突变株的生物学特性研究 | 第54-72页 |
| 5.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 5.1.1 实验菌株和动物 | 第54页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第54-55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-61页 |
| 5.2.1 生长特性测定 | 第55页 |
| 5.2.2 透射电镜观察 | 第55页 |
| 5.2.3 荧光定量PCR | 第55-58页 |
| 5.2.4 全血杀菌实验 | 第58-59页 |
| 5.2.5 氧化杀伤实验 | 第59页 |
| 5.2.6 小鼠毒力实验 | 第59-60页 |
| 5.2.7 统计与分析 | 第60-61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-70页 |
| 5.3.1 突变株的生长特性 | 第61页 |
| 5.3.2 突变株荚膜合成基因簇上各基因mRNA水平上的表达 | 第61-64页 |
| 5.3.3 突变株的透射电镜观察 | 第64-65页 |
| 5.3.4 突变株的耐血液杀伤能力 | 第65-66页 |
| 5.3.5 突变株的耐氧化杀伤能力 | 第66-67页 |
| 5.3.6 突变株的小鼠毒力 | 第67-69页 |
| 5.3.7 突变株感染小鼠后的组织载菌量 | 第69-70页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| Publication | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |