| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1 转录因子 | 第13-20页 |
| 1.1 转录因子的结构 | 第13-15页 |
| 1.2 转录因子的分类及相关功能 | 第15页 |
| 1.3 转录因子在基因工程中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 人工转录因子 | 第16-17页 |
| 1.5 转录因子研究方法 | 第17-20页 |
| 1.5.1 研究转录因子功能的方法 | 第17-18页 |
| 1.5.2 研究转录因子与DNA相关作用的方法 | 第18-20页 |
| 1.5.3 转录因子系统研究方法 | 第20页 |
| 2 蓝光调控性转录因子Aureochromes(AUREOs) | 第20-24页 |
| 2.1 AUREOs的结构特点 | 第21-22页 |
| 2.2 AUREOs的功能特点 | 第22-23页 |
| 2.3 AUREOs潜在应用—光遗传学 | 第23-24页 |
| 3 细胞大小调控因素—细胞周期 | 第24-27页 |
| 3.1 酵母细胞周期中两关键检测点的作用机制 | 第25页 |
| 3.2 周期蛋白依赖激酶(CDKs)活性调节 | 第25-26页 |
| 3.3 细胞周期网络对酵母细胞大小调控的分子机理 | 第26-27页 |
| 4 生物质能乙醇的研究现状 | 第27-32页 |
| 4.1 高性能发酵酵母的选育与改造 | 第28-30页 |
| 4.1.1 自然筛选与适应性进化 | 第28页 |
| 4.1.2 诱变育种 | 第28-29页 |
| 4.1.3 原生质体融合与杂交 | 第29页 |
| 4.1.4 代谢工程技术 | 第29-30页 |
| 4.2 酵母发酵技术及工艺 | 第30-32页 |
| 4.2.1 同步糖化发酵 | 第31页 |
| 4.2.2 固定化发酵 | 第31-32页 |
| 5 本课题立项依据及研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 微拟球藻NgAUREO1基因的克隆及真核表达 | 第34-48页 |
| 1 材料与方法 | 第34-42页 |
| 1.1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 藻种 | 第34页 |
| 1.1.2 载体与宿主 | 第34页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第34页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 1.1.5 培养基 | 第35页 |
| 1.1.6 所用引物序列见表1 | 第35页 |
| 1.2 方法 | 第35-42页 |
| 1.2.1 微拟球藻的培养与收集 | 第35-36页 |
| 1.2.2 微拟球藻总RNA提取与质量检测 | 第36-37页 |
| 1.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第37页 |
| 1.2.4 RACE技术扩增微拟球藻NgAUERO1全基因序列 | 第37-38页 |
| 1.2.5 NgAUREO1开放阅读框(ORF)序列的克隆 | 第38页 |
| 1.2.6 目的片段的连接和转化 | 第38-39页 |
| 1.2.7 重组表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 1.2.8 微拟球藻NgAUERO1基因的真核表达 | 第41-42页 |
| 2 结果与讨论 | 第42-47页 |
| 2.1 微拟球藻总RNA质量检测 | 第42-43页 |
| 2.2 微拟球藻NgAUERO1全序列获得 | 第43-45页 |
| 2.3 重组表达载体pAUR123-AUREO1的构建 | 第45-46页 |
| 2.4 真核表达微拟球藻NgAUERO1基因 | 第46-47页 |
| 3 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 NgAUREO1调控酿酒酵母细胞大小机理研究 | 第48-59页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 1.1.2 主要试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 1.1.3 所用引物序列见表1 | 第49页 |
| 1.2 方法 | 第49-51页 |
| 1.2.1 酵母细胞形态观察与生长曲线的建立 | 第49-50页 |
| 1.2.2 流式细胞仪分析酵母细胞DNA和蛋白含量的测定 | 第50页 |
| 1.2.3 NgAUREO1基因在酵母中的表达 | 第50页 |
| 1.2.4 转基因酵母中细胞周期相关基因的表达分析 | 第50-51页 |
| 1.2.5 蓝光实验 | 第51页 |
| 2 结果与讨论 | 第51-58页 |
| 2.1 转基因酿酒酵母细胞的基本特征 | 第51-53页 |
| 2.2 流式细胞仪分析细胞DNA和蛋白含量 | 第53-54页 |
| 2.3 NgAUREO1和细胞周期相关基因的转录表达分析 | 第54-57页 |
| 2.4 蓝光对转NgAUREO1酵母细胞的细胞周期相关基因的影响 | 第57-58页 |
| 3 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 转基因酵母发酵能力初步研究 | 第59-69页 |
| 1 材料与方法 | 第59-63页 |
| 1.1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第59页 |
| 1.1.4 培养基 | 第59-60页 |
| 1.2 方法 | 第60-63页 |
| 1.2.1 重铬酸钾溶液和DNS试剂以及标准品的配制 | 第60页 |
| 1.2.2 标准曲线的建立 | 第60-62页 |
| 1.2.3 转基因酵母与野生酵母发酵产乙醇能力测定 | 第62页 |
| 1.2.4 转基因酵母培养条件的单因素试验 | 第62-63页 |
| 1.2.5 转基因酵母培养基中碳源和氮源的优化 | 第63页 |
| 2 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 2.1 转基因酵母与野生酵母发酵能力 | 第63页 |
| 2.2 转基因酵母发酵条件的优化 | 第63-67页 |
| 2.2.1 接种量的优化 | 第63-64页 |
| 2.2.2 培养温度的优化 | 第64-65页 |
| 2.2.3 初始pH的优化 | 第65页 |
| 2.2.4 培养转速的优化 | 第65-66页 |
| 2.2.5 培养时间的优化 | 第66-67页 |
| 2.3 转基因酵母营养因子的优化 | 第67-68页 |
| 3 小结 | 第68-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 个人简历 | 第79页 |
| 硕士期间发表的学术论文及研究成果 | 第79页 |
