| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 微生物的生存状态 | 第13-15页 |
| 1.1.1 VBNC状态概述 | 第14页 |
| 1.1.2 VBNC状态菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.2 低温对VBNC状态菌的诱导 | 第15-16页 |
| 1.3 VBNC状态菌的检测方法 | 第16-20页 |
| 1.3.1 荧光显微镜镜检法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 分子生物学方法 | 第17-20页 |
| 1.3.2.1 PMA与细菌的相互作用 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 LAMP检测技术 | 第18-20页 |
| 1.4 低温对细菌基因表达量的影响 | 第20-21页 |
| 1.5 肠出血大肠杆菌概述 | 第21-23页 |
| 1.5.1 E.coli O157:H7 生物学特征 | 第22页 |
| 1.5.2 E.coli O157:H7 特异性靶点和志贺毒素 | 第22-23页 |
| 1.5.2.1 E.coli O157:H7 特异性靶点 | 第22页 |
| 1.5.2.2 志贺毒素 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题的研究背景、意义和内容 | 第23-25页 |
| 1.6.1 本课题的研究背景和意义 | 第23-24页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 低温储藏对VBNC状态E.coli O157 的诱导 | 第25-33页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与设备 | 第25-27页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂及材料 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基与染色液的配置 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 E.coli O157 生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2.3.2 低温储藏过程中E.coli O157 可培养数的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 低温储藏后E.coli O157 菌体总数的测定 | 第28页 |
| 2.3.4 低温储藏后E.coli O157 的活菌数目测定 | 第28页 |
| 2.3.5 扫描电子显微镜下E.coli O157 的形态 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.4.1 E.coli O157 的生长曲线的测定 | 第29页 |
| 2.4.2 低温储藏过程中E.coli O157 可培养数的变化 | 第29-30页 |
| 2.4.3 低温储藏后E.coli O157 菌体总数与活菌数测定 | 第30-31页 |
| 2.4.4 扫描电子显微镜下E.coli O157 的形态 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 LAMP检测方法的建立 | 第33-49页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 材料与设备 | 第33-36页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第33-34页 |
| 3.2.2 实验试剂及材料 | 第34-35页 |
| 3.2.3 实验仪器与设备 | 第35-36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.3.1 LAMP引物的设计与合成 | 第36页 |
| 3.3.2 模板DNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.3 LAMP反应体系的建立 | 第37页 |
| 3.3.4 优化的LAMP检测方法扩增产物荧光强度分析 | 第37-38页 |
| 3.3.5 优化的LAMP检测方法特异性和灵敏度分析 | 第38页 |
| 3.3.6 E.coli O157 血清型和志贺毒素的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-47页 |
| 3.4.1 Mg_(2+)浓度对LAMP反应体系的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.2 钙黄绿素和锰离子的浓度比对LAMP反应体系的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.3 LAMP扩增产物荧光强度分析 | 第41-43页 |
| 3.4.5 优化的LAMP方法特异性与灵敏度检测分析结果 | 第43-44页 |
| 3.4.6 E.coli O157 血清型和志贺毒素的鉴定 | 第44-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-49页 |
| 第四章 VBNC状态E.coli O157 志贺毒素的鉴定 | 第49-57页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 材料与设备 | 第49-51页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第49页 |
| 4.2.2 实验试剂及材料 | 第49-50页 |
| 4.2.3 实验仪器与设备 | 第50-51页 |
| 4.2.4 培养基与主要溶液的配置 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 细菌培养及菌体的制备 | 第51-52页 |
| 4.3.2 PMA浓度对活的E.coli O157 生长情况的影响 | 第52页 |
| 4.3.3 PMA浓度对VBNC和膜损伤状态E.coli O157 的影响 | 第52页 |
| 4.3.4 经PMA处理后各种状态菌体模板DNA的制备 | 第52-53页 |
| 4.3.5 VBNC状态E.coli O157 志贺毒素stx1 和stx2 的鉴定 | 第53页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第53-55页 |
| 4.4.1 PMA浓度对活的E.coli O157 生长情况的影响 | 第53页 |
| 4.4.2 PMA浓度对VBNC和膜损伤状态E.coli O157 的影响 | 第53-55页 |
| 4.4.3 VBNC状态E.coli O157 志贺毒素stx1 和stx2 的鉴定结果 | 第55页 |
| 4.5 小结 | 第55-57页 |
| 第五章 低温储藏对E.coli O157 毒力基因表达量的影响 | 第57-69页 |
| 5.1 前言 | 第57页 |
| 5.2 材料与设备 | 第57-59页 |
| 5.2.1 实验菌株 | 第57-58页 |
| 5.2.2 实验试剂与材料 | 第58页 |
| 5.2.3 实验仪器与设备 | 第58-59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 5.3.1 qRT-PCR引物的设计与合成 | 第59-60页 |
| 5.3.2 E.coli O157 菌株的培养 | 第60页 |
| 5.3.3 E.coli O157 菌株总RNA的提取 | 第60页 |
| 5.3.4 E.coli O157 菌株cDNA的制备 | 第60-61页 |
| 5.3.5 qRT-PCR检测E.coli O157 毒素基因的表达量 | 第61页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第61-67页 |
| 5.4.1 E.coli O157 菌株总RNA提取结果 | 第61-63页 |
| 5.4.2 qRT-PCR引物特异性检测结果 | 第63-64页 |
| 5.4.3 低温储藏对E.coli O157 毒力基因表达差异分析 | 第64-67页 |
| 5.4.3.1 低温储藏时间对E.coli O157 毒力基因表达量的影响 | 第64-66页 |
| 5.4.3.2 菌株差异性对E.coli O157 毒力基因表达量的影响 | 第66-67页 |
| 5.5 小结 | 第67-69页 |
| 结论与展望 | 第69-73页 |
| 一、结论 | 第69-71页 |
| 二、主要创新点 | 第71页 |
| 三、展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-87页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附件 | 第89页 |
