| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-29页 |
| 1 国内外研究现状分析 | 第16-23页 |
| 1.1 IgG/IgY分子结构特点 | 第16-17页 |
| 1.2 IgY理化性质 | 第17-18页 |
| 1.3 IgG的糖基化修饰 | 第18-22页 |
| 1.4 IgY的糖基化修饰 | 第22-23页 |
| 2 蛋白质糖基化改造策略 | 第23-27页 |
| 2.1 基于生物表达系统的IgG糖基化改造策略 | 第23页 |
| 2.2 化学法合成糖蛋白策略 | 第23-27页 |
| 2.2.1 随机会聚式糖基化 | 第23-24页 |
| 2.2.2 位点选择性糖基化 | 第24页 |
| 2.2.3 化学酶法糖蛋白/糖肽的合成策略 | 第24-27页 |
| 3 本课题研究的目的和意义 | 第27页 |
| 4 本课题研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 IgY的分离鉴定及去糖基化条件优化 | 第29-42页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 1.1 实验原料 | 第29页 |
| 1.2 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 1.4 试验方法 | 第30-33页 |
| 1.4.1 鸡卵黄抗体IgY粗提 | 第30-31页 |
| 1.4.2 鸡卵黄抗体IgY纯化 | 第31页 |
| 1.4.3 SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| 1.4.4 分子排阻色谱分析 | 第31页 |
| 1.4.5 MALDI-TOF/TOF MS分析 | 第31-32页 |
| 1.4.6 蛋白质浓度测定 | 第32页 |
| 1.4.7 PNGase F制备去糖基化IgY的方法建立 | 第32页 |
| 1.4.8 去糖基化IgY的分离富集 | 第32-33页 |
| 1.4.9 PAS染色分析 | 第33页 |
| 2 结果与讨论 | 第33-41页 |
| 2.1 IgY还原型SDS-PAGE图 | 第33-34页 |
| 2.2 MALDI-TOF/TOF MS定性IgY | 第34-35页 |
| 2.3 IgY凝胶色谱纯化及纯度分析 | 第35-37页 |
| 2.4 IgY糖蛋白定性分析 | 第37页 |
| 2.5 IgY去糖基化条件的优化 | 第37-39页 |
| 2.6 去糖基化IgY的富集 | 第39-41页 |
| 3 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 N-糖基化修饰对IgY分子构象稳定性的影响 | 第42-53页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1 实验原料 | 第42页 |
| 1.2 材料与试剂 | 第42-43页 |
| 1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 1.4 实验方法 | 第43-45页 |
| 1.4.1 鸡卵黄抗体IgY分离纯化 | 第43-44页 |
| 1.4.2 蛋白质浓度测定 | 第44页 |
| 1.4.3 鸡卵黄抗体IgY去糖基化 | 第44页 |
| 1.4.4 傅里叶变换红外光谱 | 第44页 |
| 1.4.5 圆二色谱分析 | 第44页 |
| 1.4.6 紫外-可见光谱分析 | 第44页 |
| 1.4.7 荧光光谱分析 | 第44-45页 |
| 2 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 2.1 IgY去糖基化分析 | 第45页 |
| 2.2 傅里叶变换红外光谱分析 | 第45-46页 |
| 2.3 远紫外圆二色光谱分析 | 第46-48页 |
| 2.4 荧光光谱分析 | 第48-49页 |
| 2.5 近紫外圆二色光谱分析 | 第49-50页 |
| 2.6 分子排阻色谱分析 | 第50页 |
| 2.7 抗盐酸胍变性实验 | 第50-52页 |
| 3 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 N-糖基化修饰对IgY分子聚合特性的影响 | 第53-62页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 1.1 实验材料 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 1.3 主要设备 | 第54页 |
| 1.4 方法 | 第54-55页 |
| 1.4.1 鸡卵黄抗体IgY去糖基化 | 第54-55页 |
| 1.4.2 蛋白质浓度测定 | 第55页 |
| 1.4.3 样品孵育 | 第55页 |
| 1.4.4 SDS-PAGE分析 | 第55页 |
| 1.4.5 SEC-HPLC分析 | 第55页 |
| 2 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 2.1 SDS-PAGE结果分析 | 第55-56页 |
| 2.2 SEC-HPLC结果分析 | 第56-61页 |
| 3 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 N-糖基化对IgY抗酶水解作用研究及Fab片段分离 | 第62-73页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 1.1 材料 | 第62-63页 |
| 1.2 主要仪器及设备 | 第63-64页 |
| 1.3 方法 | 第64-65页 |
| 1.3.1 IgY去糖基化 | 第64页 |
| 1.3.2 蛋白质浓度测定 | 第64页 |
| 1.3.3 SDS-PAGE分析 | 第64页 |
| 1.3.4 木瓜蛋白酶消化 | 第64页 |
| 1.3.5 胃蛋白酶消化 | 第64页 |
| 1.3.6 胰蛋白酶消化试验 | 第64-65页 |
| 1.3.7 胰糜蛋白酶消化试验 | 第65页 |
| 1.3.8 Western blot实验 | 第65页 |
| 2 结果与讨论 | 第65-71页 |
| 2.1 胃蛋白酶用量与孵育时间优化 | 第65-67页 |
| 2.2 木瓜蛋白酶用量与孵育时间优化 | 第67-68页 |
| 2.3 胰蛋白酶用量与孵育时间优化 | 第68-69页 |
| 2.4 糜蛋白酶用量与孵育时间优化 | 第69页 |
| 2.5 IgY Fab与Fc的分离鉴定 | 第69-70页 |
| 2.6 去糖基化IgY酶消化 | 第70-71页 |
| 3 小结 | 第71-73页 |
| 第六章 鸡卵黄抗体IgY N-糖基化分析 | 第73-83页 |
| 1 材料与方法 | 第73-77页 |
| 1.1 主要实验材料与试剂 | 第73-74页 |
| 1.2 主要仪器 | 第74-75页 |
| 1.3 方法 | 第75-77页 |
| 1.3.1 胰蛋白酶消化 | 第75页 |
| 1.3.2 H218O标记 | 第75页 |
| 1.3.3 nano LC-MS分析肽段信息 | 第75页 |
| 1.3.4 ProteinPilot软件分析 | 第75-76页 |
| 1.3.5 N-糖链的游离释放 | 第76页 |
| 1.3.6 糖链的 2-AA衍生标记 | 第76页 |
| 1.3.7 糖链的纯化 | 第76页 |
| 1.3.8 2-AA衍生物的LC-ESI-MS分析 | 第76-77页 |
| 1.3.9 数据处理 | 第77页 |
| 2 结果与讨论 | 第77-82页 |
| 2.1 nano LC ESI-MS质谱分析糖基化位点 | 第77-80页 |
| 2.2 糖谱质谱分析 | 第80-81页 |
| 2.3 HPLC结合nano-LC ESI-MS分析IgY N-糖链 | 第81页 |
| 2.4 糖链含量计算 | 第81-82页 |
| 3 小结 | 第82-83页 |
| 第七章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 1 结论 | 第83-84页 |
| 2 创新点 | 第84页 |
| 3 建议及展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
