| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 对虾过敏原研究现状 | 第12-18页 |
| 1.1.1 对虾过敏机制 | 第12-13页 |
| 1.1.2 对虾主要过敏原及其抗原表位研究现状 | 第13-16页 |
| 1.1.3 对虾抗原表位过敏原性检测方法 | 第16-18页 |
| 1.2 过敏原过敏免疫活性消减方法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 物理方法 | 第18-19页 |
| 1.2.2 化学方法 | 第19-20页 |
| 1.2.3 生物方法 | 第20页 |
| 1.3 主要研究内容与意义 | 第20-23页 |
| 1.3.1 主要研究目的与意义 | 第21页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 中国对虾原肌球蛋白过敏表位的预测及筛选 | 第23-34页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2.3 实验试剂配制 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 生物信息学方法预测抗原表位 | 第25页 |
| 2.3.2 潜在表位合成及纯度分析 | 第25页 |
| 2.3.3 间接竞争酶联免疫吸附法(icELISA)筛选抗原表位 | 第25-26页 |
| 2.3.4 竞争性dot-blot方法筛选抗原表位 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第27-32页 |
| 2.4.1 过敏蛋白结构分析 | 第27-28页 |
| 2.4.2 原肌球蛋白的综合分析 | 第28-30页 |
| 2.4.3 合成表位多肽分析 | 第30页 |
| 2.4.4 IcELISA法筛选抗原表位 | 第30-32页 |
| 2.4.5 Dot-blot法筛选抗原表位 | 第32页 |
| 2.5 小结 | 第32-34页 |
| 第三章 对虾过敏原空间结构模拟和表位关键氨基酸分析 | 第34-44页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 同源建模模板选择 | 第34-35页 |
| 3.3.2 建模 | 第35页 |
| 3.3.3 模型结构分析 | 第35页 |
| 3.3.4 表位多肽的空间 | 第35页 |
| 3.3.5 原肌球蛋白和抗原表位的氨基酸组成分析 | 第35页 |
| 3.3.6 表位氨基酸保守性分析 | 第35页 |
| 3.3.7 氨基酸突变及合成 | 第35页 |
| 3.3.8 IcELISA法筛选关键氨基酸表位 | 第35-36页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第36-43页 |
| 3.4.1 筛选源建模模板 | 第36页 |
| 3.4.2 中国对虾原肌球蛋白三维模型的构建 | 第36-37页 |
| 3.4.3 原肌球蛋白空间结构模型的评估 | 第37-38页 |
| 3.4.4 表位多肽的空间定位 | 第38-39页 |
| 3.4.5 氨基酸出现频率结果分析 | 第39-40页 |
| 3.4.6 氨基酸保守性结果分析 | 第40-42页 |
| 3.4.7 表位关键氨基酸氨基酸突变 | 第42页 |
| 3.4.8 利用icELISA法检测抗体与突变表位的结合能力 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 糖基化对抗原表位过敏原性的影响 | 第44-55页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第44-45页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第44页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 4.2.3 溶液配制 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 糖基化处理 | 第45-46页 |
| 4.3.2 ELISA法测糖基化产物 | 第46页 |
| 4.3.3 二级结构测定 | 第46页 |
| 4.3.4 糖基化反应产物中总赖氨酸含量测定 | 第46-47页 |
| 4.4 结果分析与讨论 | 第47-54页 |
| 4.4.1 原肌球蛋白糖基化产物的检测 | 第47-48页 |
| 4.4.2 多肽糖基化产物检测 | 第48-49页 |
| 4.4.3 二级结构分析 | 第49-52页 |
| 4.4.4 赖氨酸含量 | 第52-54页 |
| 4.5 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 抗原多肽致敏LAD2细胞脱颗粒模型的建立 | 第55-73页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 实验材料及仪器 | 第55-56页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-63页 |
| 5.3.1 抗原表位刺激模型 | 第56-57页 |
| 5.3.2 组胺和类胰蛋白酶含量检测 | 第57-58页 |
| 5.3.3 β-氨基己糖苷酶检测 | 第58页 |
| 5.3.4 前列腺素(PGD2)和白三烯(CysLTs)含量检测 | 第58-59页 |
| 5.3.5 细胞因子含量检测 | 第59-60页 |
| 5.3.6 细胞形态和脱颗粒电镜观察 | 第60-61页 |
| 5.3.7 荧光定量PCR(qPCR)检测细胞因子mRNA表达量 | 第61-63页 |
| 5.3.8 糖基化消减抗原表位过敏原性检测 | 第63页 |
| 5.4 实验结果分析和讨论 | 第63-71页 |
| 5.4.1 抗原刺激最低浓度确定 | 第63-64页 |
| 5.4.2 组胺和类胰蛋白酶分析 | 第64-65页 |
| 5.4.3 β-己糖胺酶含量检测 | 第65-66页 |
| 5.4.4 前列腺素和白三烯含量分析 | 第66页 |
| 5.4.5 细胞因子含量测定 | 第66-67页 |
| 5.4.6 细胞形态观察和脱颗粒电镜观察 | 第67-69页 |
| 5.4.7 细胞因子的mRNA表达量分析 | 第69-71页 |
| 5.4.8 细胞模型对消减后过敏原性多肽的检测 | 第71页 |
| 5.5 小结 | 第71-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 总结 | 第73-74页 |
| 6.2 创新点 | 第74页 |
| 6.3 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附件 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
