| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 乙型肝炎 | 第8页 |
| 1.2 乙型肝炎病毒 | 第8-9页 |
| 1.2.1 乙肝病毒的结构 | 第8-9页 |
| 1.2.2 乙肝病毒的分子生物学特征 | 第9页 |
| 1.3 乙肝表面抗原 | 第9-11页 |
| 1.3.1 乙肝表面抗原的特征 | 第9-10页 |
| 1.3.2 乙肝表面抗原的作用 | 第10页 |
| 1.3.3 乙肝疫苗的制备 | 第10-11页 |
| 1.4 基因工程 HBsAg 的制备 | 第11-12页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统 | 第11页 |
| 1.4.2 酵母表达系统 | 第11页 |
| 1.4.3 哺乳动物细胞表达系统 | 第11-12页 |
| 1.4.4 病毒表达载体系统 | 第12页 |
| 1.4.5 植物表达系统 | 第12页 |
| 1.5 酿酒酵母表达系统 | 第12-16页 |
| 1.5.1 酿酒酵母表达系统的优势缺点 | 第13页 |
| 1.5.2 重组酵母乙肝疫苗的安全性 | 第13页 |
| 1.5.3 酿酒酵母生产 HBsAg 的国内外研究现状 | 第13-14页 |
| 1.5.4 外源蛋白在酿酒酵母中的高效表达 | 第14-16页 |
| 1.6 立题依据及意义 | 第16-17页 |
| 1.7 本论文主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 培养基 | 第20页 |
| 2.4 培养方法 | 第20-21页 |
| 2.5 分子生物学操作 | 第21-25页 |
| 2.5.1 DNA 操作方法 | 第21页 |
| 2.5.2 密码子优化及 HBsAg 基因片段的获取 | 第21页 |
| 2.5.3 含启动子 TEF1 的重组质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.5.4 含不同启动子重组质粒的构建 | 第22页 |
| 2.5.5 含不同 kozak 序列重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.5.6 含不同信号肽重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.5.7 二硫键异构酶 PDI 共表达重组载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.6 酵母转化及重组菌发酵 | 第25-26页 |
| 2.7 测定与分析方法 | 第26-27页 |
| 2.7.1 细胞干重的测定 | 第26页 |
| 2.7.2 HBsAg 活性的测定及 HBsAg 的纯化 | 第26页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE 检测 | 第26页 |
| 2.7.4 蛋白浓度的测定 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-46页 |
| 3.1 乙肝表面抗原 S 基因在酿酒酵母中的表达 | 第27-29页 |
| 3.1.1 密码子优化及重组表达载体的构建 | 第27页 |
| 3.1.2 酿酒酵母工程菌株的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.3 重组酵母表达 HBsAg 及活性分析 | 第28页 |
| 3.1.4 添加 His 纯化标签对 HBsAg 表达的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.5 讨论 | 第29页 |
| 3.2 酿酒酵母表达 HBsAg 的优化 | 第29-37页 |
| 3.2.1 筛选启动子的增强 HBsAg 的表达 | 第30-31页 |
| 3.2.2 优化 Kozak 序列提高 HBsAg 的表达 | 第31-33页 |
| 3.2.3 不同信号肽对 HBsAg 表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.2.4 共表达 PDI 促进 HBsAg 表达 | 第34-36页 |
| 3.2.5 讨论 | 第36-37页 |
| 3.3 发酵优化提高 HBsAg 在酿酒酵母中的表达 | 第37-46页 |
| 3.3.1 培养条件的优化 | 第37-39页 |
| 3.3.2 培养基组分的优化 | 第39-42页 |
| 3.3.3 添加剂的优化 | 第42-44页 |
| 3.3.4 优化后 HBsAg 的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
