| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| ·乳酸菌过度发酵对于食品品质的影响 | 第15页 |
| ·德式乳杆菌保加利亚亚种的强耐酸性导致酸奶后酸化 | 第15-17页 |
| ·酸奶后酸化的形成机制 | 第16页 |
| ·目前控制后酸化的主要途径 | 第16-17页 |
| ·乳酸菌酸耐受机制的研究进展 | 第17-21页 |
| ·酸胁迫及酸耐受反应 | 第17页 |
| ·乳酸菌酸耐受机制的研究 | 第17-19页 |
| ·L.bulgaricus酸耐受机制的研究进展 | 第19-21页 |
| ·酸耐受反应(ATR)中的转录调控 | 第21-23页 |
| ·转录调控的研究方法 | 第21页 |
| ·细菌单杂交系统 | 第21-23页 |
| ·研究目的与内容 | 第23-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 L.bulgaricus酸耐受反应中差异蛋白的分离及鉴定 | 第25-38页 |
| ·材料与试剂 | 第25-27页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·酸胁迫处理的致死pH值及亚致死pH值的确定 | 第27页 |
| ·ATR的酸诱导条件的确定 | 第27页 |
| ·蛋白质样品的制备 | 第27-28页 |
| ·蛋白质双向电泳 | 第28-29页 |
| ·凝胶染色及成像 | 第29页 |
| ·2-DE数据分析 | 第29-30页 |
| ·差异蛋白的质谱鉴定 | 第30-31页 |
| ·数据的统计学处理 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-37页 |
| ·菌株酸胁迫处理的致死pH值和亚致死pH值 | 第31-32页 |
| ·ATR的酸诱导条件的确定 | 第32页 |
| ·L.bulgaricus CAUH1酸胁迫条件下的蛋白质图谱 | 第32-34页 |
| ·差异蛋白的质谱鉴定及生物信息学分析 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 RT-qPCR分析抗酸胁迫差异基因转录水平的变化 | 第38-53页 |
| ·材料与试剂 | 第38-39页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·L.bugaricus CAUH1酸胁迫处理样品的制备 | 第39-40页 |
| ·乳杆菌总RNA的提取及定量 | 第40页 |
| ·反转录制备cDNA | 第40-41页 |
| ·引物的设计及合成 | 第41-43页 |
| ·普通PCR检测引物特异性 | 第43页 |
| ·实时定量PCR检测基因转录表达差异 | 第43-44页 |
| ·抗酸胁迫差异基因参与的代谢途径分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-50页 |
| ·总RNA的提取及定量分析 | 第44-45页 |
| ·差异基因的PCR扩增及测序分析 | 第45-46页 |
| ·实时定量PCR检测基因转录水平差异 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·碳水化合物代谢及脂肪酸合成 | 第50-51页 |
| ·氨基酸代谢 | 第51-52页 |
| ·蛋白质合成 | 第52-53页 |
| 第四章 抗酸胁迫差异基因在L.lactis NZ9000中超量表达及功能验证 | 第53-68页 |
| ·材料与试剂 | 第53-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·试剂的配制 | 第54-55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·乳酸菌基因组DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·抗酸胁迫差异基因的PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·DNA的回收纯化 | 第57-58页 |
| ·抗酸胁迫差异基因的超量表达载体的构建 | 第58页 |
| ·重组载体电转化L.lactis NZ9000 | 第58-59页 |
| ·重组载体的测序分析 | 第59页 |
| ·重组菌株的抗酸胁迫能力评价 | 第59页 |
| ·Ldb0677和Pyk的SDS-PAGE检测 | 第59-60页 |
| ·重组菌株NZ0677和NZpyk对于其他胁迫的耐受能力评价 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-66页 |
| ·L.bulgaricus CAUH1的基因组提取 | 第60-61页 |
| ·抗酸胁迫差异基因的PCR扩增 | 第61页 |
| ·抗酸胁迫差异基因的超量表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·重组菌株的抗酸胁迫能力评价 | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE分析Ldb0677和Pyk的超量表达 | 第63-64页 |
| ·重组菌株NZ0677和NZpyk对于其他胁迫的耐受能力评价 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 抗酸胁迫反应中转录因子Ldb0677的功能研究 | 第68-88页 |
| ·材料与试剂 | 第68-72页 |
| ·菌株和质粒 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68-69页 |
| ·试剂的配制 | 第69-71页 |
| ·仪器设备 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-78页 |
| ·转录因子Ldb0677的克隆及重组质粒pB1H2-0677的构建 | 第72页 |
| ·大肠杆菌E.coli US0的电转化方法 | 第72-73页 |
| ·Western blot检测Omega-0677融合蛋白的表达 | 第73-74页 |
| ·细菌单杂交筛选转录因子Ldb0677的DNA结合位点 | 第74-75页 |
| ·生物信息学分析转录因子Ldb0677调控的靶基因 | 第75页 |
| ·带有His标签的Ldb0677的表达及纯化 | 第75-76页 |
| ·凝胶迁移实验(EMSA) | 第76-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-86页 |
| ·转录因子Ldb0677的克隆及重组质粒pB1H2-0677的构建 | 第78-80页 |
| ·Western Blot检测Omega-0677融合蛋白的表达 | 第80页 |
| ·细菌单杂交分析转录因子Ldb0677的DNA结合位点 | 第80-82页 |
| ·生物信息学分析转录因子Ldb0677调控的靶基因 | 第82-85页 |
| ·带有His标签的Ldb0677的表达及纯化 | 第85页 |
| ·EMSA分析Ldb0677的DNA结合特异性 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 调控抗酸胁迫基因pyk表达的转录因子的分离鉴定 | 第88-106页 |
| ·材料与试剂 | 第88-90页 |
| ·菌株和质粒 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88-89页 |
| ·试剂的配制 | 第89页 |
| ·仪器设备 | 第89-90页 |
| ·实验方法 | 第90-97页 |
| ·5'-RACE法确定pfk-pyk操纵子转录起始位点 | 第90-92页 |
| ·pfk-pyk操纵子的启动子序列分析 | 第92页 |
| ·pH3U3-TFBS“诱饵”载体的构建 | 第92-93页 |
| ·L.bulgaricus CAUH1的转录因子表达文库的构建 | 第93-96页 |
| ·Western Blot检测转录因子文库的表达情况 | 第96-97页 |
| ·细菌单杂交筛选调控pyk基因表达的转录因子 | 第97页 |
| ·结果与分析 | 第97-103页 |
| ·TRIzol法提取CAUH1总RNA | 第97-98页 |
| ·5'-RACE扩增pfk-pyk操纵子5'末端DNA片段 | 第98页 |
| ·pfk-pyk操纵子的上游启动子序列分析 | 第98-99页 |
| ·pH3U3-TFBS“诱饵”载体的构建及鉴定 | 第99-101页 |
| ·L.bulgaricus CAUH1的转录因子表达文库的构建 | 第101页 |
| ·细菌单杂交筛选调控pyk基因表达的转录因子 | 第101-103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第106-108页 |
| ·全文总结 | 第106-107页 |
| ·创新点 | 第107页 |
| ·展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附录 | 第117-121页 |
| 个人简介 | 第121页 |
