| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| ·亚硝酸盐 | 第12-16页 |
| ·简介 | 第12页 |
| ·NIT与人类健康的关系 | 第12-14页 |
| ·食品中NIT含量的控制 | 第14-16页 |
| ·生物氮循环和亚硝酸盐还原酶 | 第16-19页 |
| ·NiR的催化途径 | 第17页 |
| ·NiR的分类和性质 | 第17-19页 |
| ·NiR的研究现状 | 第19-21页 |
| ·不同物种中的NiR的酶活研究 | 第20页 |
| ·不同物种中的NiR的分离纯化研究 | 第20-21页 |
| ·不同物种中的NiR的结构性质研究 | 第21页 |
| ·NiR的克隆表达 | 第21-22页 |
| ·基因克隆表达技术 | 第21-22页 |
| ·克隆表达技术在酶性质研究中的应用 | 第22页 |
| ·蜡样芽孢杆菌 | 第22-23页 |
| ·概述 | 第22-23页 |
| ·蜡样芽孢杆菌的益生性 | 第23页 |
| ·本论文的研究意义和研究内容 | 第23-26页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 高效降亚硝酸盐的蜡样芽孢杆菌LJ01的分离鉴定 | 第26-34页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·实验材料与仪器 | 第26-28页 |
| ·实验菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·培养基和溶液 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-29页 |
| ·菌株LJ01的分子生物学鉴定和生理生化鉴定 | 第28页 |
| ·亚硝酸盐含量的测定 | 第28-29页 |
| ·菌种LJ01活化和不同生长时期降亚硝酸盐的能力测定 | 第29页 |
| ·菌株LJ01降解亚硝酸盐的能力测定 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·16S r DNA鉴定与测序结果 | 第29-31页 |
| ·系统进化分析结果 | 第31页 |
| ·菌株LJ01的分子生物学鉴定和生理生化鉴定结果 | 第31页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01的显微镜镜检结果 | 第31-32页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01生长曲线结果 | 第32页 |
| ·LJ01降亚硝酸盐能力 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 Bacillus cereus LJ01降解亚硝酸盐产物及其NiR组分的分离纯化 | 第34-49页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料与仪器 | 第34-37页 |
| ·试剂与耗材 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·常用溶液及培养基 | 第35-37页 |
| ·研究方法 | 第37-39页 |
| ·Bc LJ01及其NiR降解亚硝酸盐产物的研究 | 第37页 |
| ·NiR酶活力的测定 | 第37-38页 |
| ·亚硝酸盐还原酶的细胞内外确定 | 第38页 |
| ·亚硝酸盐还原酶的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·亚硝酸盐还原酶的分离纯化后蛋白质性质鉴定 | 第39页 |
| ·NiR分子质量的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·在LB体系中Bc LJ01降解亚硝酸盐的产物 | 第39-43页 |
| ·LJ01的亚硝酸盐还原酶的初步定位 | 第43-44页 |
| ·NiR的分离纯化 | 第44-47页 |
| ·LJ01的NiR纯化后的酶活 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 Bacillus cereus LJ01中NiR的克隆表达及其重组蛋白的性质 | 第49-72页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料与仪器 | 第49-52页 |
| ·菌株与质粒 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·培养基和常用溶液 | 第50-52页 |
| ·实验方法 | 第52-59页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01中NiR的编码基因序列查找及引物设计 | 第52页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01 DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01中NiR编码基因的扩增 | 第53页 |
| ·NiR基因PCR产物的回收及测序 | 第53页 |
| ·NiR基因PCR产物及质粒的酶切与酶切片段的回收 | 第53-55页 |
| ·NiR基因片段与载体的连接 | 第55页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态细胞的制备与转化 | 第55-56页 |
| ·重组菌的菌落PCR鉴定与筛选 | 第56-57页 |
| ·重组菌中NiR的表达鉴定 | 第57-58页 |
| ·重组NiR的分离纯化 | 第58页 |
| ·重组NiR的Native-PAGE测定 | 第58页 |
| ·重组NiR的质谱测定 | 第58页 |
| ·NiR的圆二色谱测定 | 第58-59页 |
| ·重组NiR中金属含量的测定 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-71页 |
| ·蜡样芽孢杆菌LJ01中NiR的基因编码序列 | 第59页 |
| ·目的基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·目的基因PCR产物的测序 | 第60-62页 |
| ·重组表达载体的构建结果 | 第62-64页 |
| ·重组菌株中NiR的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白NiR的分离纯化 | 第65-67页 |
| ·重组NiR的Native-PAGE测定 | 第67-68页 |
| ·重组NiR的质谱测定 | 第68-69页 |
| ·重组NiR的圆二色谱测定 | 第69-70页 |
| ·重组NiR中金属含量的测定 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 结论与展望 | 第72-74页 |
| 一、结论 | 第72页 |
| 二、创新之处 | 第72-73页 |
| 三、展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附件 | 第88页 |
