| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| ·研究的目的及意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-24页 |
| ·凝乳酶研究进展 | 第13-16页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统研究进展 | 第16-20页 |
| ·丝状真菌的原生质体技术 | 第20-24页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·菌株及载体 | 第25页 |
| ·试剂及酶类 | 第25页 |
| ·常用试剂的配制 | 第25-27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要实验设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-39页 |
| ·菌株的培养和菌种保存 | 第28页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·基因的扩增 | 第29-33页 |
| ·载体的构建 | 第33页 |
| ·黑曲霉原生质体的制备及再生 | 第33-34页 |
| ·直接转化法对黑曲霉的遗传转化 | 第34-36页 |
| ·农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第36-37页 |
| ·转化子的PCR 检测 | 第37页 |
| ·重组菌株凝乳酶活性测定 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-62页 |
| ·Cym 基因表达载体的构建 | 第39-49页 |
| ·基因与同源臂的克隆 | 第39-43页 |
| ·重叠延伸 PCR 拼接Gla5、Cym、Gla3 片段 | 第43-44页 |
| ·pAN-Gla3a 载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pEASY-hph 载体的构建 | 第45-46页 |
| ·pEASY-CYM 载体的构建 | 第46-47页 |
| ·pSZA 接头载体的构建 | 第47-48页 |
| ·pSZH-CYM 置换载体的构建 | 第48-49页 |
| ·原生质体受体系统的建立 | 第49-57页 |
| ·常规方法制备原生质体及原生质体再生 | 第49-50页 |
| ·糖化酶生产菌种黑曲霉原生质体制备和再生条件的优化 | 第50-57页 |
| ·直接转化法对黑曲霉的遗传转化 | 第57-61页 |
| ·电击法转化黑曲霉 | 第57页 |
| ·CaCl_2/PEG 法转化黑曲霉 | 第57-58页 |
| ·REMI 法转化黑曲霉 | 第58-59页 |
| ·转化子的PCR 鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组菌株的酶活测定 | 第60-61页 |
| ·农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第61-62页 |
| ·pSZH-CYM 置换载体导入农杆菌 | 第61页 |
| ·农杆菌介导法转化黑曲霉 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| ·农杆菌介导的黑曲霉转化载体的构建 | 第62页 |
| ·原生质体制备与再生最优条件的确定标准 | 第62页 |
| ·转化方法的问题 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| ·基因的克隆 | 第64页 |
| ·载体的构建 | 第64页 |
| ·黑曲霉原生质体制备与再生条件的优化 | 第64页 |
| ·牛凝乳酶基因对黑曲霉的转化 | 第64-65页 |
| ·牛凝乳酶基因在黑曲霉中的表达 | 第65页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73页 |