| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 肉制品掺假现状 | 第15页 |
| 1.2 检测肉制品掺假的意义 | 第15页 |
| 1.3 肉类掺假的分析检测技术及应用 | 第15-19页 |
| 1.3.1 PCR技术 | 第15-16页 |
| 1.3.2 色谱分析 | 第16-17页 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附技术 | 第17-19页 |
| 1.4 酶联免疫吸附技术在熟肉制品的应用 | 第19-20页 |
| 1.5 研究的意义和内容 | 第20-23页 |
| 第2章 羊肌红蛋白原核表达和纯化 | 第23-45页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第24-29页 |
| 2.2.1 实验菌株和载体 | 第24页 |
| 2.2.2 主要实验试剂和药品 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验主要溶液的配制 | 第25-28页 |
| 2.2.4 实验仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2.3 试验方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 合成羊肌红蛋白全基因及引物 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PCR扩增MMb基因 | 第30-32页 |
| 2.3.3 酶切的转换 | 第32-35页 |
| 2.3.4 MMb-pET-28a重组质粒的筛选 | 第35页 |
| 2.3.5 重组表达载体的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.6 阳性克隆株的测序 | 第36页 |
| 2.3.7 MMb目的蛋白诱导表达 | 第36-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-42页 |
| 2.4.1 羊肌红蛋白的亚克隆构建方案 | 第38-39页 |
| 2.4.2 羊肌红蛋白全基因合成的结果 | 第39页 |
| 2.4.3 MMb-pET-28a连接产物鉴定 | 第39-41页 |
| 2.4.4 MMb融合蛋白诱导条件的优化 | 第41页 |
| 2.4.5 His-MMb融合蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 2.5 本章讨论 | 第42-44页 |
| 2.5.1 MMb目的蛋白原核表达的选取 | 第42-43页 |
| 2.5.2 原核表达纯化的原理 | 第43-44页 |
| 2.6 本章结论 | 第44-45页 |
| 第3章 羊肌红蛋白单克隆抗体的制备 | 第45-59页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第46页 |
| 3.2.2 实验主要试剂 | 第46页 |
| 3.2.3 常用试剂溶液的配制 | 第46-47页 |
| 3.2.4 仪器和设备 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.3.1 动物免疫和间接法测效价 | 第48-50页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第50-52页 |
| 3.3.3 单克隆抗体的大量生产和纯化 | 第52页 |
| 3.3.4 单克隆抗体的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4 实验结果和分析 | 第53-58页 |
| 3.4.1 抗原选择及分析结果 | 第53-54页 |
| 3.4.2 免疫BALB/c小鼠抗体效价检测 | 第54-55页 |
| 3.4.3 检测杂交瘤细胞上清效价 | 第55-56页 |
| 3.4.4 腹水抗体效价检测 | 第56页 |
| 3.4.5 抗羊肌红蛋白单克隆抗体效价检测 | 第56页 |
| 3.4.6 单克隆抗体特异性检测 | 第56-57页 |
| 3.4.7 小鼠亚型分析结果 | 第57页 |
| 3.4.8 羊肌红蛋白单克隆抗体纯化结果 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58页 |
| 3.6 本章结论 | 第58-59页 |
| 第四章 建立羊肌红蛋白间接竞争ELISA检测方法 | 第59-79页 |
| 4.1 引言 | 第59-60页 |
| 4.2 实验材料和试剂 | 第60-62页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.2.2 主要试剂的配制 | 第60-61页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-66页 |
| 4.3.1 间接竞争ELISA的步骤 | 第62页 |
| 4.3.2 酶标板均一性的检测 | 第62-63页 |
| 4.3.3 优化MMb间接竞争ELISA参数条件 | 第63-66页 |
| 4.4 间接ELISA方法建立结果分析 | 第66-76页 |
| 4.4.1 酶标板均一性的检测 | 第66页 |
| 4.4.2 MMb包被原和抗血清最适浓度 | 第66-67页 |
| 4.4.3 酶标二抗工作浓度 | 第67-68页 |
| 4.4.4 最佳抗原包被条件的确定 | 第68页 |
| 4.4.5 抗原和抗体的竞争反应最适温度与时间检测结果 | 第68-69页 |
| 4.4.6 最佳封闭液的确定 | 第69页 |
| 4.4.7 最适封闭条件的确定 | 第69-70页 |
| 4.4.8 酶标二抗最适时间 | 第70页 |
| 4.4.9 最佳底物反应条件的确定 | 第70-71页 |
| 4.4.10 羊肌红蛋白间接竞争标准抑制曲线的结果 | 第71-73页 |
| 4.4.11 羊肌红蛋白间接竞争ELISA灵敏度 | 第73页 |
| 4.4.12 MMb间接竞争ELISA精密度 | 第73页 |
| 4.4.13 羊肌红蛋白回收率的测定结果 | 第73-74页 |
| 4.4.14 交叉反应率 | 第74页 |
| 4.4.15 方法适用性 | 第74-76页 |
| 4.5 讨论 | 第76-77页 |
| 4.6 小结 | 第77-79页 |
| 第5章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 5.1 结论 | 第79-80页 |
| 5.2 创新点 | 第80页 |
| 5.3 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 在学期间的主要科研成果 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92-95页 |