| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 低温酶 | 第7页 |
| 1.2 低温乳糖酶 | 第7-8页 |
| 1.2.1 低温乳糖酶的来源 | 第7-8页 |
| 1.2.2 低温乳糖酶的应用优势 | 第8页 |
| 1.3 产低温乳糖酶菌株的诱变 | 第8-9页 |
| 1.3.1 常规诱变 | 第8-9页 |
| 1.3.2 ARTP 诱变技术及其使用优势 | 第9页 |
| 1.4 低温乳糖酶的纯化 | 第9-11页 |
| 1.4.1 酶纯化的目的 | 第9-10页 |
| 1.4.2 酶纯化的方法 | 第10-11页 |
| 1.5 低温乳糖酶的酶学性质 | 第11-12页 |
| 1.5.1 低温乳糖酶的最适温度及其稳定性 | 第11页 |
| 1.5.2 低温乳糖酶的最适 pH 及其稳定性 | 第11页 |
| 1.5.3 金属离子对酶活的影响 | 第11-12页 |
| 1.6 本课题的研究意义及目的 | 第12页 |
| 1.7 论文的研究内容 | 第12-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 出发菌株 | 第14页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第14页 |
| 2.1.4 培养基 | 第14-15页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第15页 |
| 2.2 产低温乳糖酶菌株的诱变 | 第15-17页 |
| 2.2.1 出发菌株的制备 | 第15-16页 |
| 2.2.2 常压室温等离子体（ARTP）快速诱变 | 第16页 |
| 2.2.3 低温乳糖酶高产菌株的筛选 | 第16-17页 |
| 2.2.4 突变菌株遗传稳定性的分析 | 第17页 |
| 2.3 低温乳糖酶的分离纯化 | 第17-20页 |
| 2.3.1 低温乳糖酶的发酵生产 | 第17页 |
| 2.3.2 细胞破碎条件的确定 | 第17页 |
| 2.3.3 硫酸铵沉淀 | 第17页 |
| 2.3.4 Phenyl Sepharose CL-4B 疏水层析 | 第17-18页 |
| 2.3.5 Q Sepharose High Performance 阴离子交换层析 | 第18页 |
| 2.3.6 Sephacryl S-200 High Resolution 凝胶过滤层析 | 第18-19页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE 电泳 | 第19-20页 |
| 2.4 分析测定方法 | 第20-22页 |
| 2.4.1 乳糖酶活力的测定方法 | 第20页 |
| 2.4.2 ONP 标准曲线的绘制 | 第20-21页 |
| 2.4.3 可溶性蛋白的测定 | 第21-22页 |
| 2.5 低温乳糖酶酶学性质的研究 | 第22-24页 |
| 2.5.1 酶的最适反应温度及热稳定性 | 第22-23页 |
| 2.5.2 酶的最适 pH 及 pH 稳定性 | 第23页 |
| 2.5.3 不同金属离子对酶活性的影响 | 第23页 |
| 2.5.4 酶反应动力学 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-38页 |
| 3.1 产低温乳糖酶菌株的诱变 | 第24-26页 |
| 3.1.1 ARTP 诱变致死曲线的确定 | 第24页 |
| 3.1.2 低温乳糖酶高产菌株的筛选 | 第24-25页 |
| 3.1.3 突变菌株遗传稳定性的分析 | 第25-26页 |
| 3.2 低温乳糖酶的分离纯化 | 第26-31页 |
| 3.2.1 超声破碎条件的确定 | 第26-27页 |
| 3.2.2 硫酸铵沉淀 | 第27-28页 |
| 3.2.3 Phenyl Sepharose CL-4B 疏水层析 | 第28-29页 |
| 3.2.4 Q Sepharose High Performance 阴离子交换层析 | 第29-30页 |
| 3.2.5 Sephacryl S-200 High Resolution 凝胶过滤层析 | 第30-31页 |
| 3.2.6 酶的分离纯化结果 | 第31页 |
| 3.2.7 相对分子量的测定 | 第31页 |
| 3.3 低温乳糖酶酶学性质研究 | 第31-38页 |
| 3.3.1 酶的最适反应温度及其热稳定性 | 第32-34页 |
| 3.3.2 酶的最适 pH 及 pH 的稳定性 | 第34-35页 |
| 3.3.3 金属离子对酶活力的影响 | 第35-37页 |
| 3.3.4 动力学 Km值及 Vmax的测定 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录：作者攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
