| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 希瓦氏菌 | 第11-13页 |
| 1.1.1 希瓦氏菌简介 | 第11页 |
| 1.1.2 希瓦氏菌的生理特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 希瓦氏菌的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 生物膜 | 第13-19页 |
| 1.2.1 生物膜简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 生物膜结构特点 | 第14-17页 |
| 1.2.3 腐败希瓦氏菌生物膜研究现状 | 第17-19页 |
| 1.3 bpfA操纵子 | 第19-20页 |
| 1.4 论文研究目的,研究内容和方案 | 第20-22页 |
| 第二章 FlrA、 FlhG对bpfA操纵子的表达调控 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.1.2 溶液和培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 菌株、质粒和引物序列 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 菌株的培养及保存 | 第25-26页 |
| 2.2.2 3591Z报告菌株构建 | 第26页 |
| 2.2.3 突变菌株和回复突变菌株构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 生长和酶活测定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 RNA抽提和qRT-PCR | 第29-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-34页 |
| 2.3.1 FlrA、FlhG对bpfA操纵子表达的影响 | 第31-33页 |
| 2.3.2 FlrA、FlhG对bpfA转录的影响 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 FlrA、FlhG对生物膜形成的调控 | 第35-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 主要仪器和试剂配制 | 第35页 |
| 3.1.2 溶液和培养基 | 第35页 |
| 3.1.3 菌株、质粒和引物序列 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 3.2.1 菌株的培养及保存 | 第36页 |
| 3.2.2 突变菌株和回复突变菌株构建 | 第36页 |
| 3.2.3 生物膜形成和量化 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第37-38页 |
| 3.4 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 FlrA对bpfA操纵子的调控机制研究 | 第39-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 主要仪器和试剂配制 | 第39页 |
| 4.1.2 溶液和培养基 | 第39页 |
| 4.1.3 菌株、质粒和引物序列 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 菌株的培养及保存 | 第40页 |
| 4.2.2 构建表达菌株 | 第40-41页 |
| 4.2.3 FlrA蛋白纯化 | 第41页 |
| 4.2.4 凝胶电泳迁移实验 | 第41-42页 |
| 4.2.5 CHIP和qRT-PCR分析 | 第42-43页 |
| 4.2.6 DNase Ⅰ footprinting | 第43页 |
| 4.2.7 引物延伸分析 | 第43-44页 |
| 4.2.8 定点突变 | 第44页 |
| 4.2.9 酶活测定 | 第44页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第44-48页 |
| 4.3.1 EMSA验证了FlrA与启动子结合 | 第44-45页 |
| 4.3.2 ChIP-qPCR说明FlrA是bpfA操纵子的抑制子 | 第45-46页 |
| 4.3.3 DNase Ⅰ FootPrinting确定了FlrA与启动子结合位点 | 第46-47页 |
| 4.3.4 定点突变评估启动子的转录活性 | 第47-48页 |
| 4.4 小结 | 第48-49页 |
| 第五章 c-di-GMP对FlrA与bpfA启动子结合的调控 | 第49-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1 主要仪器和试剂配制 | 第49页 |
| 5.1.2 溶液和培养基 | 第49页 |
| 5.1.3 菌株、质粒和引物序列 | 第49-50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 5.2.1 菌株的培养及保存 | 第50页 |
| 5.2.2 荧光偏振 | 第50-51页 |
| 5.2.3 突变菌株构建 | 第51页 |
| 5.2.4 酶活测定 | 第51页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第51-54页 |
| 5.3.1 c-di-GMP对FlrA与bpfA启动子结合的影响 | 第51-53页 |
| 5.3.2 DosD对bpfA操纵子的影响 | 第53-54页 |
| 5.4 小结 | 第54-55页 |
| 第六章 总结 | 第55-58页 |
| 6.1 结论 | 第55-56页 |
| 6.2 展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第69页 |
