| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 海参 | 第12-14页 |
| 1.1.1 海参概述 | 第12页 |
| 1.1.2 海参的种类和分布 | 第12-13页 |
| 1.1.3 海参的营养与功效 | 第13页 |
| 1.1.4 海参的自溶 | 第13-14页 |
| 1.1.5 海参内源酶的研究进展 | 第14页 |
| 1.2 乙酰胆碱酯酶(AChE)概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 AChE的结构特点 | 第15页 |
| 1.2.2 AChE的反应特点及机理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 AChE的分子存在形式 | 第16页 |
| 1.2.4 AChE的功能及应用 | 第16-17页 |
| 1.3 AChE分离纯化的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 AChE的来源 | 第17页 |
| 1.3.2 AChE的分离纯化方法 | 第17-19页 |
| 1.3.3 昆虫来源AChE的分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.3.4 植物来源AChE的分离纯化 | 第20页 |
| 1.3.5 动物来源AChE的分离纯化 | 第20-21页 |
| 1.4 本论文研究的意义及主要内容 | 第21-22页 |
| 第二章 海参乙酰胆碱酯酶粗酶的特性研究 | 第22-37页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 材料 | 第22页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 海参AChE粗酶的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 蛋白质含量的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2.1 考马斯亮蓝G-250染色法测蛋白质含量 | 第25页 |
| 2.3.2.2 Lowry法测定蛋白质含量 | 第25-26页 |
| 2.3.3 AChE活性的测定 | 第26页 |
| 2.3.4 AChE粗酶的特性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.4.1 最适反应pH的确定 | 第26页 |
| 2.3.4.2 最适反应温度的确定 | 第26页 |
| 2.3.4.3 pH稳定性的确定 | 第26-27页 |
| 2.3.4.4 酶热稳定性的确定 | 第27页 |
| 2.3.4.5 底物浓度对酶的影响 | 第27页 |
| 2.3.4.6 底物特异性的研究 | 第27页 |
| 2.3.4.7 金属离子对酶的影响 | 第27页 |
| 2.3.4.8 抑制剂对酶的影响 | 第27页 |
| 2.3.5 AChE在海参肠自溶中的作用分析 | 第27-28页 |
| 2.3.5.1 AChE在海参肠自溶前后的变化 | 第27-28页 |
| 2.3.5.2 AChE抑制剂对海参自溶的影响 | 第28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-36页 |
| 2.4.1 海参AChE粗酶性质的研究 | 第28-34页 |
| 2.4.1.1 海参AChE粗酶的最适反应pH | 第28-29页 |
| 2.4.1.2 海参AChE粗酶的最适反应温度 | 第29页 |
| 2.4.1.3 海参AChE粗酶的pH稳定性 | 第29-30页 |
| 2.4.1.4 海参AChE粗酶的热稳定性 | 第30-31页 |
| 2.4.1.5 底物浓度对海参AChE粗酶的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.1.6 海参AChE粗酶的底物特异性 | 第32-33页 |
| 2.4.1.7 金属离子对海参AChE粗酶的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.1.8 抑制剂对海参AChE粗酶的影响 | 第34页 |
| 2.4.2 AChE在海参自溶过程中的作用 | 第34-36页 |
| 2.4.2.1 AChE在海参肠自溶前后的变化 | 第34-35页 |
| 2.4.2.2 AChE抑制剂对海参肠自溶的影响 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 海参肠乙酰胆碱酯酶的纯化及其特性研究 | 第37-52页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-38页 |
| 3.2.1 材料 | 第37页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.3.1 海参肠AChE粗酶的提取 | 第38页 |
| 3.3.2 考马斯亮蓝G-250染色法测蛋白质含量 | 第38页 |
| 3.3.3 AChE活性的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.4 海参肠AChE的分离纯化 | 第39页 |
| 3.3.4.1 DEAE-52阴离子交换层析 | 第39页 |
| 3.3.4.2 Sepharose CL-6B凝胶层析 | 第39页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| 3.3.6 海参肠AChE酶学特性研究 | 第39-41页 |
| 3.3.6.1 最适反应pH的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.6.2 最适反应温度的确定 | 第40页 |
| 3.3.6.3 pH稳定性的确定 | 第40页 |
| 3.3.6.4 酶热稳定性的确定 | 第40页 |
| 3.3.6.5 底物特异性及反应动力学的研究 | 第40页 |
| 3.3.6.6 抑制剂对酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第41-50页 |
| 3.4.1 海参肠AChE的分离纯化 | 第41-43页 |
| 3.4.1.1 DEAE-52阴离子交换层析 | 第41页 |
| 3.4.1.2 Sepharose CL-6B凝胶层析 | 第41-43页 |
| 3.4.2 海参肠AChE的纯化结果分析 | 第43-44页 |
| 3.4.2.1 纯化倍数及得率 | 第43页 |
| 3.4.2.2 SDS-PAGE对分子量的测定 | 第43-44页 |
| 3.4.3 海参肠AChE的酶学特性 | 第44-50页 |
| 3.4.3.1 酶的最适pH | 第44-45页 |
| 3.4.3.2 酶的最适反应温度 | 第45-46页 |
| 3.4.3.3 酶的pH稳定性 | 第46页 |
| 3.4.3.4 酶的热稳定性 | 第46-48页 |
| 3.4.3.5 底物特异性的研究 | 第48-49页 |
| 3.4.3.6 抑制剂对酶活力的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 海参肠乙酰胆碱酯酶亲和层析洗脱条件的优化 | 第52-63页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 材料 | 第52页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第52页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.3.1 海参肠粗酶的提取 | 第53页 |
| 4.3.2 AChE活性的测定 | 第53页 |
| 4.3.3 DEAE-52阴离子交换层析 | 第53页 |
| 4.3.4 亲和层析 | 第53-55页 |
| 4.3.4.1 CEA亲和柱的制备 | 第53-54页 |
| 4.3.4.2 亲和层析洗脱条件优化 | 第54-55页 |
| 4.3.5 电泳分析 | 第55-56页 |
| 4.3.5.1 SDS-PAGE电泳 | 第55页 |
| 4.3.5.2 Native-PAGE电泳 | 第55-56页 |
| 4.3.5.3 活性染色 | 第56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 4.4.1 亲和层析洗脱条件优化 | 第56-61页 |
| 4.4.1.1 离子强度对吸附效果的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.1.2 洗脱液的选择对分离效果的影响 | 第58-60页 |
| 4.4.1.3 样品纯度对分离效果的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.2 电泳分析 | 第61-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录A | 第71页 |
