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蛋清蛋白水解物的制备、结构及其生物活性的研究

摘要第1-5页
Abstract第5-15页
第一章 绪论第15-34页
   ·鸡蛋与蛋清第15-17页
     ·鸡蛋第15页
     ·蛋清的化学组成第15-17页
   ·蛋清的研究现状第17-21页
     ·提取溶菌酶第17-19页
     ·蛋清的冷杀菌技术第19页
     ·蛋清的功能性质第19-21页
     ·蛋清酶水解物第21页
   ·生物活性肽研究进展第21-25页
     ·抗凝血肽研究进展第22-23页
     ·抗氧化肽的研究进展第23-25页
   ·本课题的立题背景和研究意义第25-26页
     ·鸡蛋的深度开发和利用,增加鸡蛋附加值第25页
     ·制备具有确切生物活性功能的活性肽,开发功能性配料第25-26页
   ·主要研究内容第26-27页
 参考文献第27-34页
第二章 抗凝血酶活性测定方法的建立第34-45页
   ·前言第34-35页
   ·材料和仪器第35-36页
     ·原料第35页
     ·试剂第35页
     ·仪器第35-36页
   ·实验方法第36-38页
     ·凝血酶效价的测定第36页
     ·纤维蛋白原含量的测定第36页
     ·方法原理第36页
     ·测量波长的确定第36页
     ·pH 值的确定第36-37页
     ·NaCl 浓度的确定第37页
     ·未加抑制物的吸光值测定第37页
     ·添加抑制物的吸光值测定第37页
     ·EWPH 对凝血酶的抑制率Y 和抑制活性αi 的计算第37页
     ·可信度判断第37页
     ·测定方法的适用范围第37-38页
     ·灵敏度测定第38页
     ·重复性测定第38页
   ·结果与讨论第38-43页
     ·纤维蛋白原含量第38页
     ·纤维蛋白凝固物的测定波长第38-39页
     ·pH 对吸光值的影响第39页
     ·NaCl 浓度对吸光值的影响第39-40页
     ·可信度判断第40-41页
     ·测定方法的适用范围第41-42页
     ·灵敏度和重复性第42-43页
   ·本章小结第43页
 参考文献第43-45页
第三章 蛋清酶解前的热处理与水解物的脱盐方法研究第45-65页
   ·前言第45页
   ·材料和仪器第45-47页
     ·材料第45-47页
     ·仪器第47页
   ·实验方法第47-50页
     ·蛋白酶的活力测定及酶活残留率计算第47页
     ·蛋白质含量的测定第47页
     ·天然蛋清对酶抑制作用的测定第47-48页
     ·在不同pH 下热处理的蛋清对酶抑制作用的测定第48页
     ·在不同温度下热处理的蛋清对酶抑制作用的测定第48页
     ·不同pH 下热处理蛋清的制备第48页
     ·不同温度下热处理蛋清的制备第48页
     ·蛋清的水解与水解度的测定第48-49页
     ·圆二色性(Circular dichroic,CD)测定第49页
     ·大孔吸附树脂的预处理第49页
     ·静态吸附试验第49-50页
     ·静态解吸试验第50页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对EWPH 的静态吸附动力学第50页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对EWPH 吸附行为的热动力学第50页
     ·数据处理第50页
   ·结果与讨论第50-62页
     ·天然蛋清对酶的抑制作用第50-51页
     ·不同pH 下热处理后蛋清的溶解性第51-52页
     ·不同pH 值下热处理后的蛋清对蛋白酶的抑制作用第52-53页
     ·不同温度热处理后的蛋清对蛋白酶的抑制作用第53-54页
     ·热处理的起始pH 值和温度对DH 的影响第54-55页
     ·蛋白质的二级结构对DH 的影响第55-57页
     ·对EWPH 的静态吸附第57-58页
     ·对EWPH 的静态解吸第58-59页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对EWPH 的静态吸附动力学第59页
     ·DA201-C 大孔吸附树脂对EWPH 的吸附热力学第59-62页
   ·本章小结第62页
 参考文献第62-65页
第四章 蛋清蛋白水解酶的筛选及其水解物的生化特性研究第65-91页
   ·前言第65-66页
   ·材料和仪器第66页
     ·材料第66页
     ·仪器第66页
   ·实验方法第66-71页
     ·酶活的测定第66-67页
     ·水解蛋白酶水解蛋清能力的比较第67-68页
       ·底物溶液的配制第67页
       ·水解方法第67页
       ·pH-stat 法第67-68页
     ·不同DH 的蛋清蛋白水解物(EWPH)的制备方法第68页
     ·DH 计算第68页
     ·EWPH 的脱盐第68页
     ·抗氧化活性测定第68-69页
       ·对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除作用第68页
       ·对羟基自由基(·OH)的清除作用第68-69页
       ·对超氧阴离子自由基(O2·-)的清除作用第69页
     ·抗凝血酶活性第69页
     ·蛋白质含量测定第69页
     ·不同疏水性的EWPH 组分的制备第69页
     ·凝胶过滤层析分离组分的制备第69-70页
     ·氨基酸分析第70页
     ·游离氨基酸分析第70页
     ·相对分子质量分布测定第70页
     ·水解物的疏水值计算第70页
     ·体外模拟消化实验第70-71页
     ·数据处理第71页
   ·结果与分析第71-87页
     ·不同蛋白酶水解蛋清能力的比较第71-72页
     ·不同DH 的EWPH 的抗氧化活性第72-74页
       ·对DPPH·的清除能力第72-73页
       ·对·OH 的清除能力第73-74页
       ·对O2·-的清除能力第74页
     ·不同DH 的EWPH 的抗凝血酶活性第74-75页
     ·两种EWPH 的氨基酸组成及营养评价第75-77页
     ·两种EWPH 的游离氨基酸组成第77-78页
     ·两种EWPH 的相对分子质量分布第78-79页
     ·抗氧化活性组分的疏水性质第79-81页
     ·抗凝血酶活性组分的疏水性质第81页
     ·活性组分的相对分子质量分布第81-82页
     ·抗凝血酶活性组分的氨基酸组成分析第82-85页
     ·抗氧化活性与氨基酸组成的相关性第85-86页
     ·峰2 和峰3 的相对分子质量分布第86页
     ·体外消化对EWPH 的生物活性的影响第86-87页
   ·本章小结第87-88页
 参考文献第88-91页
第五章 酶膜生物反应器制备蛋清蛋白活性肽的研究第91-103页
   ·前言第91-92页
   ·材料和仪器第92页
     ·材料第92页
     ·仪器第92页
   ·实验方法第92-96页
     ·酶解工艺流程第92-93页
     ·正交试验设计第93-94页
     ·BP 人工神经网络的设计及对实验数据的拟合第94-95页
       ·人工神经网络学习样本的选择与设计第94页
       ·BP 人工神经网络设计第94-95页
       ·BP 人工神经网络对酶解过程的优化第95页
     ·蛋白质含量测定第95页
     ·抗凝血酶活性测定第95页
     ·抗氧化活性测定第95页
     ·氨基酸分析第95页
     ·游离氨基酸分析第95页
     ·相对质量分布分析第95-96页
   ·结果与讨论第96-101页
     ·正交试验结果第96页
     ·极差分析第96-97页
     ·人工神经网络的预测与优化第97-100页
       ·BP 网络的训练第97-98页
       ·神经网络对酶解过程的优化第98-100页
     ·EMBR 抗凝血酶产物的氨基酸分析及营养评价第100页
     ·游离氨基酸分析第100-101页
     ·相对分子质量组成第101页
   ·本章小结第101-102页
 参考文献第102-103页
第六章 抗凝血酶活性肽的分离纯化及构效关系研究第103-121页
   ·前言第103-104页
   ·材料与设备第104-105页
     ·材料第104页
     ·仪器第104-105页
   ·实验方法第105-107页
     ·凝血酶抑制率测定第105页
     ·蛋白质含量的测定第105页
     ·大孔吸附树脂层析分离活性肽第105页
     ·凝胶层析分离活性肽第105页
     ·半制备RP-HPLC 分离活性肽第105页
     ·分析型RP-HPLC 分离活性肽第105-106页
     ·MALDI-TOF-TOF MS 测定活性肽结构第106页
     ·合成的活性肽分离纯化第106页
     ·抗凝血酶活性肽抑制类型测定第106页
     ·分子对接模型的构建第106-107页
   ·结果与讨论第107-119页
     ·大孔吸附树脂层析分离EWPH第107-108页
     ·Sephadex G-15 凝胶层析分离M75 组分第108-109页
     ·半制备RP-HPLC 分离M75-G4第109-110页
     ·分析型RP-HPLC 分离M75-G4-R2,M75-G4-R5,M75-G4-R7第110-112页
     ·M75-G4-R2-r1, M75-G4-R5-r2, M75-G4-R7-r3, M75-G4-R7-r4 的纯度鉴定第112-114页
     ·M75-G4-R7-r3 的结构表征第114-115页
     ·M75-G4-R7-r3 抗凝血酶肽的抑制类型判断第115-116页
     ·抗凝血酶活性肽(Leu-Val-Phe-Lys)的构效关系研究第116-118页
     ·M75-G4-R2-r1、M75-G4-R5-r2、M75-G4-R7-r4 中主要母离子的结构表征第118-119页
   ·本章小结第119页
 参考文献第119-121页
主要结论第121-123页
展望第123-124页
论文创新点第124-125页
附录A 合成肽(序列Leu-Val-Phe-Lys)的鉴定报告第125-126页
附录B M75-G4-R2-r1 组分中活性肽的MS/MS 分析图谱第126-130页
附录C M75-G4-R5-r2 组分中活性肽的MS/MS 分析图谱第130-132页
附录D M75-G4-R7-r4 组分中活性肽的MS/MS 分析图谱第132-135页
攻读博士学位期间发表的论文第135-136页
致谢第136页

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