| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 D-乳酸 | 第12页 |
| 1.2 D-乳酸的用途 | 第12-13页 |
| 1.2.1 D-乳酸在医药和农药行业的应用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 D-乳酸在聚乳酸领域的应用 | 第13页 |
| 1.3 D-乳酸的生产现状 | 第13-14页 |
| 1.4 微生物发酵产D-乳酸的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.1 国内研究进展 | 第14页 |
| 1.4.2 国外研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 玉米秸秆资源利用的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.5.1 玉米秸秆的生物炼制 | 第15-16页 |
| 1.5.2 玉米秸秆的预处理工艺 | 第16-19页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.7 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 德氏乳杆菌保加利亚亚种生长特性研究 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 实验培养基 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 高效液相色谱测定D-乳酸含量 | 第23页 |
| 2.2.2 菌株的活化与鉴定 | 第23页 |
| 2.2.3 菌株的电子显微镜观察 | 第23页 |
| 2.2.4 不同温度下菌株生长曲线的测定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 pH值对菌株生长的影响 | 第24页 |
| 2.2.6 转速对菌株生长的影响 | 第24页 |
| 2.2.7 温度对菌株产酸的影响 | 第24页 |
| 2.2.8 接种量对菌株产酸的影响 | 第24页 |
| 2.2.9 葡萄糖含量对菌株产酸的影响 | 第24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-30页 |
| 2.3.1 发酵液D-乳酸含量测定 | 第24-25页 |
| 2.3.2 德式乳杆菌保加利亚亚种菌体形态与菌株鉴定 | 第25页 |
| 2.3.3 不同温度德式乳杆菌保加利亚亚种生长曲线 | 第25-26页 |
| 2.3.4 pH值对菌体生长的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.5 转速对菌株生长的影响 | 第27页 |
| 2.3.6 温度对德式乳杆菌保加利亚亚种产酸的影响 | 第27-28页 |
| 2.3.7 接种量对德式乳杆菌保加利亚亚种产酸的影响 | 第28-29页 |
| 2.3.8 初始葡萄糖含量对菌体产酸量的影响 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 德氏乳杆菌保加利亚亚种工程菌的构建 | 第31-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 实验培养基 | 第31-32页 |
| 3.1.3 实验主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.4 实验主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-41页 |
| 3.2.1 德式乳杆菌保加利亚亚种代谢途径的分析 | 第34页 |
| 3.2.2 德式乳杆菌保加利亚亚种L-乳酸脱氢酶基因的敲除实验方案 | 第34-35页 |
| 3.2.3 德式乳杆菌保加利亚亚种L-乳酸脱氢酶基因(ldb0094)敲除质粒的构建 | 第35-38页 |
| 3.2.4 德式乳杆菌保加利亚亚种L-乳酸脱氢酶基因(ldb0120)敲除质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.5 重组乙酸激酶、ldb0094、ldb0120敲除质粒电转德式乳杆菌保加利亚亚种 | 第39-41页 |
| 3.2.6 工程菌发酵产物的测定 | 第41页 |
| 3.2.7 野生型与工程菌(DS-A、DS-L1、DS-L2)实时定量PCR(qT-PCR)验证 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-52页 |
| 3.3.1 德式乳杆菌保加利亚亚种基因组的提取 | 第41-42页 |
| 3.3.2 L-乳酸脱氢酶(ldb0094)上下游片段的扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.3 L-乳酸脱氢酶(ldb0094)上下游片段的拼接 | 第43-44页 |
| 3.3.4 重组克隆质粒(ldb0094)的验证 | 第44-45页 |
| 3.3.5 重组敲除质粒的验证 | 第45页 |
| 3.3.6 L-乳酸脱氢酶(ldb0120)上下游片段的克隆 | 第45-46页 |
| 3.3.7 L-乳酸脱氢酶(ldb0120)上下游片段的拼接 | 第46-47页 |
| 3.3.8 重组克隆(ldb0120)质粒PCR验证结果 | 第47页 |
| 3.3.9 重组克隆质粒(ldb0120)双酶切验证结果 | 第47-48页 |
| 3.3.10 ldb0120基因敲除质粒的PCR验证 | 第48页 |
| 3.3.11 电转转化子的验证 | 第48-50页 |
| 3.3.12 工程菌发酵产物的测定 | 第50-51页 |
| 3.3.13 qT-PCR测定结果 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 固体酸预处理玉米秸秆的研究 | 第54-64页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 纤维素酶活的测定 | 第55页 |
| 4.2.2 玉米秸秆中纤维素、半纤维素、木质素的含量的测定 | 第55-56页 |
| 4.2.3 玉米秸秆结构的测定 | 第56页 |
| 4.2.4 固体酸预处理玉米秸秆 | 第56页 |
| 4.2.5 不同方法预处理玉米秸秆 | 第56页 |
| 4.2.6 预处理玉米秸秆的酶解实验 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-63页 |
| 4.3.1 固体酸预处理玉米秸秆结果分析 | 第56-58页 |
| 4.3.2 正交试验结果 | 第58-59页 |
| 4.3.3 纤维素酶添加量对酶解效率的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.4 不同预处理方法的比较 | 第60-61页 |
| 4.3.5 预处理玉米秸秆的成分变化 | 第61页 |
| 4.3.6 预处理玉米秸秆的结构变化 | 第61-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 德氏乳杆菌保加利亚亚种工程菌在玉米秸秆中的应用 | 第64-71页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第64-65页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 野生型与工程菌生长特性的比较 | 第65页 |
| 5.2.2 野生型与工程菌在玉米秸秆为添加物培养基中的性能研究 | 第65页 |
| 5.2.3 野生型与工程菌在玉米秸秆为唯一碳源培养基中的发酵特性研究 | 第65-66页 |
| 5.2.4 发酵液D-乳酸含量的测定 | 第66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 5.3.1 原菌与工程菌(DS-L2)生长曲线的测定 | 第66页 |
| 5.3.2 野生型与工程菌在以玉米秸秆为添加物的培养基中的特性研究 | 第66-67页 |
| 5.3.3 野生型与工程菌在以玉米秸秆为唯一发酵碳源培养基中的性能研究 | 第67-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 作者简介 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
