| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 Abbreviations | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| 1.1 肉色化学概述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 肌红蛋白化学 | 第15-17页 |
| 1.1.1.1 肌红蛋白结构 | 第15-16页 |
| 1.1.1.2 肌红蛋白氧化还原动力学 | 第16-17页 |
| 1.1.2 高铁肌红蛋白还原体系与肉色 | 第17-20页 |
| 1.1.2.1 高铁肌红蛋白还原酶系统 | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 线粒体与高铁肌红蛋白的还原 | 第18页 |
| 1.1.2.3 三羧酸循环与高铁肌红蛋白的还原 | 第18-20页 |
| 1.1.3 脂肪氧化与肉色 | 第20-21页 |
| 1.1.3.1 肉中的脂肪氧化 | 第20页 |
| 1.1.3.2 脂肪氧化与肌红蛋白氧化相互作用 | 第20-21页 |
| 1.2 肉色褐变的影响因素及控制策略 | 第21-24页 |
| 1.2.1 影响肉色褐变的因素 | 第21-23页 |
| 1.2.1.1 贮藏温度 | 第21页 |
| 1.2.1.2 pH值 | 第21页 |
| 1.2.1.3 光照 | 第21-22页 |
| 1.2.1.4 氧分压及耗氧率 | 第22页 |
| 1.2.1.5 肌肉部位 | 第22页 |
| 1.2.1.6 细菌污染 | 第22-23页 |
| 1.2.2 控制肉色褐变的主要方法 | 第23-24页 |
| 1.2.2.1 包装方式 | 第23页 |
| 1.2.2.2 添加抗氧化剂 | 第23-24页 |
| 1.2.2.3 贮藏条件 | 第24页 |
| 1.3 蛋白质组学研究概述 | 第24-29页 |
| 1.3.1 蛋白质组学技术简介 | 第24-25页 |
| 1.3.2 双向电泳 | 第25页 |
| 1.3.3 SRM定量技术 | 第25-26页 |
| 1.3.4 QconCATs技术 | 第26-27页 |
| 1.3.5 SWATH定量技术 | 第27-28页 |
| 1.3.6 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 1.4 蛋白质组学技术应用于肉色研究 | 第29-31页 |
| 1.4.1 肌红蛋白结构的物种特异性 | 第29页 |
| 1.4.2 脂肪氧化与肉色褐变关系 | 第29-30页 |
| 1.4.3 肌浆蛋白质组与肉色 | 第30-31页 |
| 1.5 本课题的研究目的及意义 | 第31页 |
| 1.6 本课题的主要研究内容 | 第31-33页 |
| 1.7 技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 冷藏条件下不同肌肉肉色相关理化指标的变化 | 第34-44页 |
| 2.1 前言 | 第34-35页 |
| 2.2 实验试剂及仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第35页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.3.1 肉样品的处理 | 第35-36页 |
| 2.3.2 色差值的测定 | 第36页 |
| 2.3.3 pH值的测定 | 第36页 |
| 2.3.4 三种肌红蛋白百分含量的测定 | 第36页 |
| 2.3.5 MRA值的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.6 TBARS值的测定 | 第37页 |
| 2.3.7 数据统计分析 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-43页 |
| 2.4.1 冷藏后肉色的变化 | 第38-39页 |
| 2.4.2 冷藏后pH值的变化 | 第39页 |
| 2.4.3 冷藏后三种肌红蛋白含量的变化 | 第39-40页 |
| 2.4.4 冷藏后高铁肌红蛋白还原酶活力的变化 | 第40-42页 |
| 2.4.5 冷藏后TBARS值的变化 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 冷藏条件下不同肌肉肌浆蛋白质组的变化及生物信息学分析 | 第44-69页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 实验试剂及仪器设备 | 第44-46页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-49页 |
| 3.3.1 牛肉肌浆蛋白质组的提取 | 第46页 |
| 3.3.2 蛋白质定量 | 第46页 |
| 3.3.3 双向电泳 | 第46-47页 |
| 3.3.4 凝胶图像扫描分析 | 第47页 |
| 3.3.5 差异点质谱鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.6 生物信息学分析 | 第48页 |
| 3.3.7 数据统计分析 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-68页 |
| 3.4.1 不同贮藏时间肉的肌浆蛋白质组的变化 | 第49-56页 |
| 3.4.1.1 ST的肌浆蛋白质组的变化 | 第49-52页 |
| 3.4.1.2 LL的肌浆蛋白质组的变化 | 第52-54页 |
| 3.4.1.3 PM的肌浆蛋白质组的变化 | 第54-56页 |
| 3.4.2 差异蛋白与肉色指标的相关性分析 | 第56-61页 |
| 3.4.2.1 与ST的肉色指标相关的蛋白 | 第56-58页 |
| 3.4.2.2 与LL的肉色指标相关的蛋白 | 第58-60页 |
| 3.4.2.3 与PM的肉色指标相关的蛋白 | 第60-61页 |
| 3.4.3 肉色相关蛋白的生物信息学分析 | 第61-68页 |
| 3.4.3.1 GO分析 | 第61-66页 |
| 3.4.3.2 蛋白质相互作用分析 | 第66-68页 |
| 3.5 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 肉色相关生物标志物SRM和SWATH定量方法的开发 | 第69-88页 |
| 4.1 前言 | 第69页 |
| 4.2 实验试剂及仪器设备 | 第69-71页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第69-70页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第70-71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-76页 |
| 4.3.1 无标QconCAT标准蛋白的表达 | 第71-73页 |
| 4.3.1.1 QconCAT蛋白质粒的设计与构建 | 第71页 |
| 4.3.1.2 QconCAT质粒转化E.coli | 第71页 |
| 4.3.1.3 QconCAT的E.coli诱导表达 | 第71-72页 |
| 4.3.1.4 QconCAT包涵体蛋白的分离纯化 | 第72页 |
| 4.3.1.5 QconCAT蛋白的脱盐 | 第72页 |
| 4.3.1.6 QconCAT蛋白表达的SDS-PAGE验证 | 第72-73页 |
| 4.3.2 肉样品的处理 | 第73页 |
| 4.3.3 蛋白质的消化 | 第73页 |
| 4.3.4 SRM方法的开发 | 第73-74页 |
| 4.3.4.1 液质联用仪器基本参数的设置 | 第73页 |
| 4.3.4.2 最优母离子-子离子对的选择 | 第73-74页 |
| 4.3.4.3 最优液相色谱洗脱时间的选择 | 第74页 |
| 4.3.4.4 最优质谱参数的选择 | 第74页 |
| 4.3.4.5 保留时间的确定 | 第74页 |
| 4.3.5 SWATH-MS方法的开发 | 第74-76页 |
| 4.3.5.1 液质联用仪器基本参数的设置 | 第75页 |
| 4.3.5.2 最优母离子-子离子对的选择 | 第75页 |
| 4.3.5.3 肉样品DDA数据的获取 | 第75页 |
| 4.3.5.4 构建离子谱图库 | 第75-76页 |
| 4.3.6 数据处理 | 第76页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第76-87页 |
| 4.4.1 无标QconCAT标准蛋白的设计和表达 | 第76-79页 |
| 4.4.1.1 QconCAT质粒的构建 | 第76-78页 |
| 4.4.1.2 QconCAT标准蛋白的成功表达 | 第78-79页 |
| 4.4.2 SRM方法的建立与优化 | 第79-84页 |
| 4.4.2.1 优化的母离子-子离子对 | 第79-80页 |
| 4.4.2.2 优化的液相色谱洗脱时间 | 第80-82页 |
| 4.4.2.3 优化的质谱参数及Skeduled SRM方法的建立 | 第82-84页 |
| 4.4.3 SWATH方法的建立 | 第84-87页 |
| 4.4.3.1 优化的母离子-子离子对 | 第84-85页 |
| 4.4.3.2 SWATH数据的软件处理 | 第85-87页 |
| 4.5 小结 | 第87-88页 |
| 第五章 SRM和SWATH方法的定量比较 | 第88-104页 |
| 5.1 前言 | 第88页 |
| 5.2 实验试剂及仪器设备 | 第88-89页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第88-89页 |
| 5.2.2 主要仪器设备 | 第89页 |
| 5.3 实验方法 | 第89-91页 |
| 5.3.1 蛋白质组样品的提取 | 第89-90页 |
| 5.3.2 蛋白质的消化 | 第90页 |
| 5.3.3 SRM分析 | 第90页 |
| 5.3.4 SWATH分析 | 第90页 |
| 5.3.5 Skyline数据提取 | 第90-91页 |
| 5.3.6 数据处理 | 第91页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第91-103页 |
| 5.4.1 目标肽段检测能力的比较 | 第91-97页 |
| 5.4.2 方法检测重现性的比较 | 第97-99页 |
| 5.4.3 定量的线性和灵敏度比较 | 第99-101页 |
| 5.4.4 目标蛋白的相对定量比较 | 第101-103页 |
| 5.5 小结 | 第103-104页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第104-106页 |
| 6.1 全文总结 | 第104页 |
| 6.2 论文的创新点 | 第104-105页 |
| 6.3 展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 个人简介 | 第120页 |
