| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 乳酸菌 | 第11页 |
| 1.2 LAB细菌素 | 第11-18页 |
| 1.2.1 LAB细菌素的分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 LAB细菌素的生物合成及调控 | 第12-14页 |
| 1.2.3 异源表达LAB细菌素 | 第14-15页 |
| 1.2.4 主要肠球菌细菌素 | 第15-18页 |
| 1.3 高通量全基因组测序技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 肠球菌素基因的挖掘与注释 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 E.faeciumBZ2全基因组测序 | 第21-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-23页 |
| 2.1.1 E.faeciumBZ2的培养与基因组DNA的提取 | 第21页 |
| 2.1.2 基因组测序和拼接 | 第21页 |
| 2.1.3 基因组组分预测 | 第21-22页 |
| 2.1.4 基因预测、注释和蛋白质分类 | 第22页 |
| 2.1.5 肠球菌素基因分析及挖掘 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-38页 |
| 2.2.1 数据产出及质量控制 | 第23-24页 |
| 2.2.2 基因组拼接组装 | 第24-27页 |
| 2.2.3 基因组组分预测 | 第27-29页 |
| 2.2.4 基因功能分析 | 第29-33页 |
| 2.2.5 全基因组图谱 | 第33页 |
| 2.2.6 肠球菌素基因预测和挖掘 | 第33-38页 |
| 2.3 小结 | 第38-40页 |
| 3 重组质粒的构建与原核表达 | 第40-65页 |
| 3.1 试验材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1 试验菌株与质粒 | 第40-41页 |
| 3.1.2 基因片段设计与合成 | 第41页 |
| 3.1.3 试验所用试剂 | 第41页 |
| 3.1.4 试验所用培养基和溶液配置 | 第41-42页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第42页 |
| 3.2 试验方法 | 第42-51页 |
| 3.2.1 E.faeciumBZ2基因组的提取与目的基因的检测 | 第42-43页 |
| 3.2.2 目的基因entA和entB基因扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.3 PCR产物的回收与纯化 | 第44页 |
| 3.2.4 载体的连接 | 第44-45页 |
| 3.2.5 重组质粒的转化 | 第45页 |
| 3.2.6 阳性克隆筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.7 重组质粒的提取 | 第46-47页 |
| 3.2.8 pET-28a质粒进行双酶切并纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.9 T4连接 | 第48页 |
| 3.2.10 重组蛋白表达与条件的优化 | 第48-49页 |
| 3.2.11 重组蛋白的变性与过滤 | 第49页 |
| 3.2.12 重组蛋白的柱上纯化与复性 | 第49-50页 |
| 3.2.13 重组蛋白的除盐与浓缩 | 第50页 |
| 3.2.14 目的蛋白定量 | 第50页 |
| 3.2.15 抑菌圈测定 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-64页 |
| 3.3.1 目的基因entA和entB的扩增和酶切 | 第51-52页 |
| 3.3.2 pEasy-T1重组质粒的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.3 pET-28a重组质粒的构建 | 第54-57页 |
| 3.3.4 pET-entA-Transetta和pET-entB-Transetta菌株的构建 | 第57-59页 |
| 3.3.5 诱导条件的优化 | 第59-61页 |
| 3.3.6 重组蛋白的纯化及验证 | 第61-64页 |
| 3.4 小结 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 5 总结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88页 |
