| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 近江牡蛎概述 | 第13页 |
| 1.2 生物活性肽的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.2.1 化学提取法 | 第14页 |
| 1.2.2 微生物发酵法 | 第14页 |
| 1.2.3 化学合成法 | 第14页 |
| 1.2.4 基因工程法 | 第14-15页 |
| 1.2.5 酶解法 | 第15页 |
| 1.3 近江牡蛎多肽研究现状 | 第15-17页 |
| 1.4 多肽的分离纯化方法研究 | 第17-18页 |
| 1.4.1 膜分离技术 | 第17页 |
| 1.4.2 离子交换色谱 | 第17页 |
| 1.4.3 凝胶色谱法 | 第17-18页 |
| 1.4.4 反相高效液相色潽法(RP-HPLC) | 第18页 |
| 1.5 多肽的结构鉴定 | 第18-19页 |
| 1.5.1 连续流快原子轰击质谱 | 第18页 |
| 1.5.2 电喷雾离子化质谱 | 第18-19页 |
| 1.5.3 基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱 | 第19页 |
| 1.6 抗光老化活性研究 | 第19-20页 |
| 1.7 本课题研究意义及技术路线 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究意义 | 第20-21页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 近江牡蛎多肽的制备及酶解条件的优化 | 第23-32页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料及设备 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 实验仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 原料粗蛋白测定 | 第24-25页 |
| 2.3.2 原料总糖测定 | 第25页 |
| 2.3.3 牡蛎多肽的制备方法 | 第25页 |
| 2.3.4 氧自由基清除能力测定(ORAC) | 第25-26页 |
| 2.4 结果及讨论 | 第26-31页 |
| 2.4.1 近江牡蛎原料的基本化学组成 | 第26页 |
| 2.4.2 近江牡蛎多肽酶解工艺条件优化 | 第26-29页 |
| 2.4.3 酶解时间(A)、pH(B)、加酶量(C)的交互作用对ORAC的影响 | 第29-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 近江牡蛎多肽的分离纯化及结构鉴定 | 第32-41页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料及设备 | 第32-33页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.2 实验仪器设备 | 第33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.3.1 膜超滤法分离纯化近江牡蛎多肽 | 第33-34页 |
| 3.3.2 凝胶层析法分离纯化近江牡蛎多肽 | 第34页 |
| 3.3.3 蛋白质回收率测定 | 第34-35页 |
| 3.3.4 ORAC活性测定 | 第35页 |
| 3.3.5 UPLC-MS/MS分析多肽序列 | 第35页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第35-40页 |
| 3.4.1 膜超滤后的分离组分蛋白质回收率比较 | 第35-36页 |
| 3.4.2 膜超滤后的分离组分ORAC活性比较 | 第36页 |
| 3.4.3 凝胶层析法分离纯化近江牡蛎多肽 | 第36-37页 |
| 3.4.4 纯化主要组分OP-Ⅰa的结构解析 | 第37-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 近江牡蛎多肽的抗氧化活性 | 第41-53页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料及设备 | 第41-43页 |
| 4.2.1 实验原料与试剂 | 第41-43页 |
| 4.2.2 实验仪器设备 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.3.1 还原力测定 | 第43-44页 |
| 4.3.2 清除羟基自由基活性测定 | 第44页 |
| 4.3.3 超氧阴离子自由基清除率测定 | 第44-45页 |
| 4.3.4 DPPH自由基清除率测定 | 第45-46页 |
| 4.3.5 ABTS自由基清除率测定 | 第46-47页 |
| 4.4 结果及讨论 | 第47-52页 |
| 4.4.1 近江牡蛎多肽的还原力 | 第47-48页 |
| 4.4.2 近江牡蛎多肽的清除羟基自由基能力 | 第48-49页 |
| 4.4.3 近江牡蛎多肽清除超氧阴离子自由基能力 | 第49-50页 |
| 4.4.4 近江牡蛎多肽清除DPPH自由基能力 | 第50-51页 |
| 4.4.5 近江牡蛎多肽清除ABTS自由基能力 | 第51-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 纯化组分OP-Ⅰa的抗光老化活性 | 第53-70页 |
| 5.1 前言 | 第53-54页 |
| 5.2 实验材料及设备 | 第54-55页 |
| 5.2.1 实验材料及试剂 | 第54-55页 |
| 5.2.2 实验仪器设备 | 第55页 |
| 5.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 5.3.1 HaCaT细胞模型的建立 | 第55页 |
| 5.3.2 亚甲基蓝染色法测定细胞活力 | 第55-56页 |
| 5.3.3 HaCaT细胞内活性氧(ROS)的测定 | 第56页 |
| 5.3.4 HaCaT细胞内MMP-1、IL-6含量的测定 | 第56页 |
| 5.3.5 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析 | 第56-58页 |
| 5.4 结果及讨论 | 第58-68页 |
| 5.4.1 HaCaT细胞的形态观察 | 第58-59页 |
| 5.4.2 OP-Ⅰa在光老化模型中对HaCaT细胞存活率(细胞活力)的影响 | 第59-60页 |
| 5.4.3 OP-Ⅰa在光老化模型中对HaCaT细胞ROS的影响 | 第60-61页 |
| 5.4.4 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞悬浮液中MMP-1含量的影响 | 第61-62页 |
| 5.4.5 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞悬浮液中IL-6含量的影响 | 第62-63页 |
| 5.4.6 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞IL-1β基因表达量的影响 | 第63-64页 |
| 5.4.7 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞IL-8基因表达量的影响 | 第64-65页 |
| 5.4.8 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞c-Jun基因表达量的影响 | 第65-66页 |
| 5.4.9 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞c-Fos基因表达量的影响 | 第66-67页 |
| 5.4.10 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞NF-κβ基因表达量的影响 | 第67-68页 |
| 5.4.11 OP-Ⅰa对辐照后HaCaT细胞P38MAPK基因表达量的影响 | 第68页 |
| 5.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81页 |
