| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 β-胡萝卜素的应用及生产现状 | 第10-11页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素 | 第10页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素及β-胡萝卜素的应用 | 第10-11页 |
| 1.1.3 β-胡萝卜素的生产现状 | 第11页 |
| 1.2 β-胡萝卜素的生物合成途径 | 第11-16页 |
| 1.2.1 β-胡萝卜素的上游合成途径MEP | 第11-13页 |
| 1.2.2 β-胡萝卜素的上游合成途径MVA | 第13-14页 |
| 1.2.3 MVA与MEP结合提高β-胡萝卜素产量 | 第14页 |
| 1.2.4 β-胡萝卜素的下游合成途径 | 第14-16页 |
| 1.3 多基因同时调控的意义及目前存在的不足 | 第16-18页 |
| 1.3.1 多基因同时调控的意义 | 第16-17页 |
| 1.3.2 多基因同时调控方法目前存在的不足 | 第17-18页 |
| 1.4 本论文的解决方案及研究内容 | 第18-21页 |
| 第二章 MVA途径的引入及调控提高β-胡萝卜素产量 | 第21-42页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.5 主要培养基 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR引物 | 第24-25页 |
| 2.3 试验方法 | 第25-32页 |
| 2.3.1 菌种培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2 产物产量测定 | 第26页 |
| 2.3.2.1 利用产物提取 | 第26页 |
| 2.3.2.2 细胞干重测定 | 第26页 |
| 2.3.2.3 产物定量测定 | 第26页 |
| 2.3.3 质粒转化方法 | 第26-27页 |
| 2.3.3.1 化转 | 第26页 |
| 2.3.3.2 电转感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.3.3.3 电击转化 | 第27页 |
| 2.3.4 PCR扩增体系和条件 | 第27-30页 |
| 2.3.4.1 Phusion~(TM)超保真DNA聚合酶 | 第27-28页 |
| 2.3.4.2 PrimeSTAR~(TM) HS DNA聚合酶 | 第28-29页 |
| 2.3.4.32xTaq MasterMix（含染料）DNA聚合酶 | 第29-30页 |
| 2.3.5 Golden Gate连接体系和条件 | 第30页 |
| 2.3.6 质粒构建方法 | 第30-31页 |
| 2.3.7 点突变的方法 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-41页 |
| 2.4.1 多基因同时调控MVA途径质粒文库的构建 | 第32-36页 |
| 2.4.1.1 利用Golden Gate对基因mvaE、mvaS点突变 | 第32-33页 |
| 2.4.1.2 MVA途径基因的扩增 | 第33-34页 |
| 2.4.1.3 骨架扩增 | 第34-35页 |
| 2.4.1.4 利用Golden Gate构建多基因调控质粒文库的原理 | 第35-36页 |
| 2.4.2 转化子的筛选以及基因表达分析 | 第36-41页 |
| 2.4.2.1 文库菌落的初筛 | 第36-37页 |
| 2.4.2.2 β-胡萝卜素相对产量 | 第37-38页 |
| 2.4.2.3 MVA基因RBS测序 | 第38-40页 |
| 2.4.2.4 RBS理论强度及调控分析 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 同时调控crtE、crtY、crtI、crtB基因提高β-胡萝卜素产量 | 第42-52页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第43-46页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.4 主要溶液 | 第43页 |
| 3.2.5 主要培养基 | 第43页 |
| 3.2.6 PCR引物 | 第43-45页 |
| 3.2.7 启动子序列 | 第45-46页 |
| 3.3 试验方法 | 第46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-51页 |
| 3.4.1 底盘细胞的构建 | 第46-47页 |
| 3.4.2 表达载体的构建 | 第47页 |
| 3.4.3 β-萝卜素基因表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| 3.4.4 选取特征菌落测序，并测产量 | 第49-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
