| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 海产品中副溶血弧菌危害及其关键致病因子 | 第11-12页 |
| 1.1.1 副溶血弧菌生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 海产品副溶血弧菌污染危害情况及致病机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 海产共生菌引起副溶血弧菌致病力增强机制探索 | 第12页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 副溶血弧菌毒力因子检测及分析技术日趋成熟 | 第12-13页 |
| 1.2.2 群体感应是副溶血弧菌毒力关键调控系统 | 第13-15页 |
| 1.3 本研究的目的意义、研究内容与创新点 | 第15-17页 |
| 1.3.1 研究目的与意义 | 第15页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 1.3.3 创新点 | 第16-17页 |
| 2 海产品中几种共生菌与副溶血弧菌共培养对毒力因子表达的影响 | 第17-30页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株 | 第17-18页 |
| 2.1.2 试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 菌株培养方法 | 第19页 |
| 2.2.2 常规PCR检测副溶血弧菌tdh基因 | 第19-20页 |
| 2.2.3 共培养对副溶血弧菌tdh基因表达的影响 | 第20-21页 |
| 2.2.4 溶血活性 | 第21页 |
| 2.2.5 生物被膜共培养体系 | 第21页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第21页 |
| 2.3 结果 | 第21-28页 |
| 2.3.1 常规PCR测定共生菌耐热直接溶血毒素基因tdh基因 | 第21-22页 |
| 2.3.2 共培养对副溶血弧菌溶血活性的影响 | 第22-23页 |
| 2.3.3 耐热直接溶血毒素基因 tdh 表达量 | 第23-25页 |
| 2.3.4 腐败希瓦氏菌不同时间共培养时间对副溶血弧菌 tdh 表达量影响 | 第25-26页 |
| 2.3.5 腐败希瓦氏菌与 VP 缺陷菌株共培养 | 第26-27页 |
| 2.3.6 生物被膜 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第28-30页 |
| 3 腐败希瓦氏菌培养液粗提物对副溶血性弧菌AHLs信号分子的降解作用 | 第30-41页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.2 试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 菌株培养方法 | 第31页 |
| 3.2.2 副溶血弧菌信号分子提取信号分子提取液的制备 | 第31页 |
| 3.2.3 腐败希瓦氏菌上清蛋白提取 | 第31页 |
| 3.2.4 蛋白分离纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.5 分离蛋白对信号分子降解 | 第32-33页 |
| 3.2.6 粗蛋白的电泳分析。 | 第33-34页 |
| 3.3 结果 | 第34-40页 |
| 3.3.1 粗蛋白分离纯化 | 第34-36页 |
| 3.3.1.1 检测波长的确定 | 第34-35页 |
| 3.3.1.2 腐败希瓦氏菌粗提蛋白洗脱曲线 | 第35-36页 |
| 3.3.2 洗脱峰对信号分子降解 | 第36-38页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE电泳分析 | 第38-39页 |
| 3.3.4 调控模式图 | 第39-40页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 4 副溶血弧菌AHLs信号分子降解酶腐败希瓦氏菌酰胺酶的功能解析 | 第41-49页 |
| 4.1 序列与工具 | 第41页 |
| 4.1.1 序列 | 第41页 |
| 4.1.2 工具 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-42页 |
| 4.3 腐败希瓦氏菌酰胺酶acylase生物信息学分析结果 | 第42-47页 |
| 4.3.1 酰胺酶acylase理化性质分析、预测 | 第42-43页 |
| 4.3.2 acylase亚细胞定位分析 | 第43页 |
| 4.3.3 信号肽预测 | 第43-44页 |
| 4.3.4 跨膜区预测 | 第44-45页 |
| 4.3.5 二级结构预测 | 第45-46页 |
| 4.3.6 acylase功能域、结构域三级结构预测 | 第46页 |
| 4.3.7 同源性分析 | 第46-47页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 5 腐败希瓦氏菌acylase异源表达以及酶学特性 | 第49-58页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第49页 |
| 5.1.1 材料 | 第49页 |
| 5.1.2 试剂 | 第49页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 副溶血弧菌信号分子的提取 | 第49-50页 |
| 5.2.2 腐败希瓦氏菌蛋白分离纯化 | 第50页 |
| 5.2.3 acylase大肠杆菌异源表达 | 第50-51页 |
| 5.2.4 温度对蛋白降解活性影响 | 第51页 |
| 5.2.5 pH值对蛋白降解活性影响 | 第51页 |
| 5.2.6 金属离子对酰胺酶蛋白降解活性影响 | 第51页 |
| 5.2.7 EDTA对蛋白降解活性影响 | 第51页 |
| 5.2.8 蛋白降解功能基团研究 | 第51页 |
| 5.2.9 HPLC-MS/MS检测条件 | 第51-52页 |
| 5.3 结果 | 第52-57页 |
| 5.3.1 异源表达及蛋白纯化 | 第52页 |
| 5.3.2 温度对蛋白降解活性影响 | 第52-53页 |
| 5.3.3 pH值对信号分子降解活性影响 | 第53-54页 |
| 5.3.4 金属离子对蛋白降解活性影响 | 第54-55页 |
| 5.3.5 EDTA对蛋白降解活性影响 | 第55-56页 |
| 5.3.6 酰胺酶功能基团探究 | 第56-57页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第57-58页 |
| 6 总结与展望 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80-81页 |
| 导师 | 第81页 |
