| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 松弛素的背景 | 第12页 |
| 1.2 松弛素的结构 | 第12-14页 |
| 1.3 松弛素的组织来源 | 第14页 |
| 1.4 松弛素的生理功能 | 第14-17页 |
| 1.4.1 松弛素对生殖系统的影响 | 第14-15页 |
| 1.4.2 松弛素有降解胶原蛋白的作用 | 第15页 |
| 1.4.3 松弛素对心血管系统的作用 | 第15-16页 |
| 1.4.4 松弛素在临床上的应用及前景 | 第16-17页 |
| 1.5 松弛素的生物活性检测 | 第17页 |
| 1.6 松弛素的体外制备 | 第17-20页 |
| 第二章 人松弛素原H2类似物基因的设计及在毕赤酵母中的诱导型分泌表达 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 工具酶及试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第22-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 载体pPICZaA的图谱 | 第25-26页 |
| 2.2.2 RH2的结构设计及基因合成 | 第26页 |
| 2.2.3 重组质粒pPICZaA-RH2的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组质粒pPICZaA-RH2转化毕赤酵母GS115 | 第29-31页 |
| 2.2.6 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的诱导及表达产物的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.8 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的浓度分析 | 第32页 |
| 2.2.9 表达产物的Western Blot鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-38页 |
| 2.3.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.3.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组质粒的测序结果 | 第34页 |
| 2.3.4 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的高抗性筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.5 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.3.6 高抗性重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 2.3.7 重组蛋白pPICZaA-RH2-GS115的浓度分析 | 第36-37页 |
| 2.3.8 表达产物的Western Blot鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4.1 密码子的偏爱性 | 第38页 |
| 2.4.2 松弛素前体的C肽设计 | 第38-39页 |
| 2.4.3 信号肽切除位点的选择 | 第39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 人松弛素原H2类似物在毕赤酵母中的组成型表达及活性鉴定 | 第40-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-44页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 工具酶及试剂 | 第40-42页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第42-44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-53页 |
| 3.2.1 载体pGAPZaA的图谱 | 第44-46页 |
| 3.2.2 重组质粒pGAPZa A-RH2的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.3 重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.4 重组质粒pGAPZa A-RH2转化毕赤酵母GS115 | 第48-49页 |
| 3.2.5 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的筛选与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.6 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的诱导及表达产物的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.7 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的浓度分析 | 第51页 |
| 3.2.8 重组质粒pGAPZa A-RH2转化毕赤酵母SMD1168 | 第51-52页 |
| 3.2.9 重组蛋白pGAPZa A-RH2-SMD1168的筛选与鉴定 | 第52页 |
| 3.2.10 重组蛋白pGAPZaA-RH2-SMD1168的诱导及表达产物的鉴定 | 第52页 |
| 3.2.11 重组蛋白pGAPZaA-RH2-SMD1168的浓度分析 | 第52页 |
| 3.2.12 表达产物的Western Blot鉴定 | 第52页 |
| 3.2.13 RH2的二级质谱分析 | 第52-53页 |
| 3.2.14 RH2的纯化及人工C肽的切除 | 第53页 |
| 3.2.15 重组松弛素的活性检测 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-64页 |
| 3.3.1 重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第54页 |
| 3.3.3 重组质粒的测序结果 | 第54页 |
| 3.3.4 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的高抗性筛选 | 第54-55页 |
| 3.3.5 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.6 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| 3.3.7 重组蛋白pGAPZa A-RH2-GS115的浓度分析 | 第57-58页 |
| 3.3.8 重组蛋白pGAPZa A-RH2-SMD1168的筛选 | 第58-59页 |
| 3.3.9 重组蛋白pGAPZa A-RH2-SMD1168的PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.10 重组蛋白pGAPZaA-RH2-SMD1168的Tricine-SDS-PAGE分析 | 第60-61页 |
| 3.3.11 重组蛋白pGAPZaA-RH2-SMD1168的浓度分析 | 第61页 |
| 3.3.12 表达产物的Western Blot鉴定 | 第61页 |
| 3.3.13 RH2的二级质谱分析 | 第61-63页 |
| 3.3.14 RH2的纯化及人工C肽的切除 | 第63-64页 |
| 3.3.15 重组松弛素的活性检测 | 第64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-65页 |
| 3.4.1 Tricine-SDS-PAGE及纯化 | 第64页 |
| 3.4.2 Zeocin高抗性菌株的筛选 | 第64页 |
| 3.4.3 表达载体pPICZaA和pGAPZaA的比较 | 第64-65页 |
| 3.4.4 毕赤酵母GS115和SMD1168的比较 | 第65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 结论和创新点 | 第66-67页 |
| 4.1 结论 | 第66页 |
| 4.2 创新点 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72页 |
