| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 绪论 | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 甘草次酸概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 甘草次酸的结构与理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 甘草次酸的功能 | 第11-14页 |
| 1.1.3 甘草次酸的制备 | 第14-15页 |
| 1.1.4 甘草次酸的应用 | 第15页 |
| 1.2 甘草次酸的生物合成 | 第15-17页 |
| 1.2.1 萜类的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.2 甘草次酸的生物合成途径 | 第16-17页 |
| 1.2.3 甘草次酸生物合成的关键酶 | 第17页 |
| 1.3 萜类化合物的酵母合成优势 | 第17-18页 |
| 1.4 酿酒酵母中代谢途径的人工组装策略 | 第18-19页 |
| 1.4.1 基于限制性内切酶的方法 | 第18-19页 |
| 1.4.2 基于同源重组的方法 | 第19页 |
| 1.5 酿酒酵母合成萜类的情况及高效调控策略 | 第19-22页 |
| 1.5.1 强化合成途径酶的表达 | 第20-21页 |
| 1.5.2 改造中心代谢 | 第21页 |
| 1.5.3 改造竞争途径降低中间代谢物 | 第21-22页 |
| 1.5.4 合成产物的转移与发酵过程 | 第22页 |
| 1.6 本课题研究的内容与意义 | 第22-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第25-28页 |
| 2.1.3 培养基 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 酵母基因组的提取 | 第29页 |
| 2.2.2 目标基因的扩增及基因表达盒构建 | 第29-30页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 酵母总RNA的提取及反转录 | 第31-32页 |
| 2.2.5 基因表达水平检测 | 第32页 |
| 2.2.6 质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.7 大肠杆菌的转化 | 第33页 |
| 2.2.8 酿酒酵母感受态的制备 | 第33页 |
| 2.2.9 酿酒酵母的转化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 阳性克隆的筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.11 酿酒酵母的培养 | 第35页 |
| 2.3 甘草次酸及其代谢产物的提取与测定 | 第35-37页 |
| 2.3.1 酿酒酵母中甘草次酸及其代谢产物的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 甘草次酸及其代谢产物的测定 | 第35-37页 |
| 第3章 甘草次酸合成途径在酿酒酵母中的构建 | 第37-53页 |
| 3.1 甘草次酸生物合成途径的设计 | 第38-39页 |
| 3.2 酿酒酵母启动子与终止子的克隆 | 第39-42页 |
| 3.3 基因表达盒的构建 | 第42-47页 |
| 3.3.1 外源基因的密码子优化 | 第42-43页 |
| 3.3.2 外源基因的克隆与表达盒构建 | 第43-47页 |
| 3.4 甘草次酸合成途径在酿酒酵母中的组装 | 第47-49页 |
| 3.5 甘草次酸合成途径在酿酒酵母中的表达验证 | 第49-51页 |
| 3.6 酿酒酵母工程菌C-CPR12发酵产物的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.7 小结 | 第52-53页 |
| 第4章 甘草次酸人工合成细胞的优化与发酵 | 第53-63页 |
| 引言 | 第53-54页 |
| 4.1 酿酒酵母细胞底盘的优选 | 第54页 |
| 4.2 强化 2.3-氧化鲨烯流对甘草次酸合成的影响 | 第54-58页 |
| 4.3 过表达法尼基焦磷酸合酶对甘草次酸合成的影响 | 第58-61页 |
| 4.4 不同工程菌株的发酵效果 | 第61-62页 |
| 4.5 小结 | 第62-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 5.1 结论 | 第63页 |
| 5.2 对今后工作的建议与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73-74页 |
| 导师评阅表 | 第74页 |
