| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-19页 |
| ·苯乳酸的简介 | 第9页 |
| ·苯乳酸的作用以及应用 | 第9-12页 |
| ·抑菌作用 | 第9-10页 |
| ·药理作用以及医药中的应用 | 第10-11页 |
| ·苯乳酸食品中的应用 | 第11-12页 |
| ·苯乳酸的其它应用 | 第12页 |
| ·苯乳酸的合成方法 | 第12-14页 |
| ·苯乳酸的合成途径 | 第14-15页 |
| ·催化 PPA 为 PLA 的乳酸脱氢酶 | 第15-16页 |
| ·甲酸脱氢酶和辅酶再生 | 第16-18页 |
| ·本课题研究目的及意义 | 第18页 |
| ·本课题的研究内容 | 第18-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-28页 |
| ·实验材料与实验设备 | 第19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-28页 |
| ·相关培养基的配置 | 第19-20页 |
| ·相关试剂配制 | 第20页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)检测苯乳酸的方法 | 第20页 |
| ·P. ac 和 P. pe 产 PLA 机理探究 | 第20-21页 |
| ·PaLDH、PpD-LDH、OpFDH 酶基因引物设计以及基因克隆 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态制备方法 | 第21-22页 |
| ·重组工程菌的构建 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的抽提方法 | 第23页 |
| ·重组工程菌的诱导表达 | 第23页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第23-24页 |
| ·Lorry 法测重组酶的蛋白含量测定 | 第24-25页 |
| ·重组酶的酶活检测 | 第25页 |
| ·重组酶的酶学性质研究 | 第25-26页 |
| ·重组乳酸脱氢酶与重组甲酸脱氢酶构建辅酶 NADH 再生体系 | 第26-28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-50页 |
| ·乳酸片球菌和戊糖片球菌产苯乳酸机理探究 | 第28-32页 |
| ·乳酸片球菌和戊糖片球菌产苯乳酸以及 4-羟基苯乳酸鉴定 | 第28-30页 |
| ·P.ac 产 PLA 和 OH-4-PLA 机理探究 | 第30-32页 |
| ·P. ac 和 P. pe 中 D-LDH 的相关研究 | 第32-41页 |
| ·P. ac 和 P. pe 中 LDH 基因序列以及 LDH 氨基酸序列对比分析 | 第32-33页 |
| ·重组 LDH 工程菌的诱导表达以及 LDH 的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·重组 LDH 酶活鉴定 | 第34-35页 |
| ·LDH 酶学性质研究 | 第35-41页 |
| ·甲酸脱氢酶的表达纯化与性质鉴定 | 第41-47页 |
| ·甲酸脱氢酶基因序列以及氨基酸序列对比分析 | 第41-43页 |
| ·重组 OpFDH 工程菌的诱导表达以及 OpFDH 的分离纯化 | 第43页 |
| ·OpFDH 酶学性质研究 | 第43-47页 |
| ·PpLDH 与 OpFDH 构建辅酶 NADH 再生体系 | 第47-50页 |
| ·辅酶 NADH 再生体系的构建 | 第47页 |
| ·PpLDH 与 OpFDH 偶联产 PLA 条件优化 | 第47-50页 |
| 4 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录一 | 第61-62页 |
| 附录二 | 第62-64页 |
