| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 血栓疾病的概述 | 第12页 |
| 1.2 纳豆激酶研究概述 | 第12-17页 |
| 1.2.1 纳豆激酶概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 纳豆激酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 纳豆激酶的来源 | 第14页 |
| 1.2.4 纳豆激酶的理化特性 | 第14-15页 |
| 1.2.5 纳豆激酶的结构 | 第15页 |
| 1.2.6 纳豆激酶的活性测定 | 第15-16页 |
| 1.2.7 纳豆激酶的分离纯化制备 | 第16页 |
| 1.2.8 纳豆激酶研究现状及前景 | 第16-17页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统的概况 | 第17-18页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌新型基因敲除和敲入系统的建立 | 第20-50页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第20-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.2 试验仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 Knock plasmid new zilian质粒的构建 | 第22-26页 |
| 2.2.2 Knock plasmid new质粒的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 Knock plasmid new质粒中突变的改造 | 第29-30页 |
| 2.2.4 纳豆激酶基因的敲入 | 第30-32页 |
| 2.2.5 同源重组淀粉酶酶基因的敲除 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-48页 |
| 2.3.1 Knock plasmid new zilian质粒的构建 | 第33-39页 |
| 2.3.2 Knock plasmid new质粒的构建 | 第39-43页 |
| 2.3.3 Knock plasmid new质粒中突变的改造 | 第43-46页 |
| 2.3.4 纳豆激酶基因的敲入 | 第46-47页 |
| 2.3.5 淀粉酶基因的敲除 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌/大肠杆菌双表达质粒的构建 | 第50-68页 |
| 3.1 试验材料与仪器 | 第50-51页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第50页 |
| 3.1.2 试验仪器设备 | 第50-51页 |
| 3.2 试验方法 | 第51-57页 |
| 3.2.1 一种改进的适用于枯草芽孢杆菌的总DNA提取方法 | 第51页 |
| 3.2.2 枯草芽孢杆菌的总DNA提取方法对其他基因组提取的适用性检测 | 第51-52页 |
| 3.2.3 pShuttle-1质粒的构建 | 第52-55页 |
| 3.2.4 pShuttle-1-natto质粒的构建 | 第55-57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-66页 |
| 3.3.1 枯草芽孢杆菌的总DNA提取 | 第57-58页 |
| 3.3.2 枯草芽孢杆菌的总DNA提取方法对其他基因组提取的适用性验证 | 第58-61页 |
| 3.3.3 pShuttle-1质粒的构建 | 第61-65页 |
| 3.3.4 pShuttle-1-natto质粒的构建 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-68页 |
| 3.4.1 引物的设计 | 第66页 |
| 3.4.2 PCR条件 | 第66页 |
| 3.4.3 Pfu聚合酶的使用 | 第66页 |
| 3.4.4 克隆载体的构建 | 第66页 |
| 3.4.5 基因组DNA新型提取方法 | 第66-68页 |
| 第四章 纳豆激酶的生物信息学预测分析 | 第68-74页 |
| 4.1 试验方法 | 第68页 |
| 4.2 分析结果 | 第68-73页 |
| 4.2.1 理化性质的分析 | 第68-69页 |
| 4.2.2 信号肽分析 | 第69页 |
| 4.2.3 跨膜结构域分析 | 第69-70页 |
| 4.2.4 亲水性及疏水性分析 | 第70-71页 |
| 4.2.5 二级结构预测和分析 | 第71-72页 |
| 4.2.6 三级结构的分析 | 第72页 |
| 4.2.7 同源性比对 | 第72-73页 |
| 4.3 讨论与结论 | 第73-74页 |
| 第五章 结论与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
