| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 立题依据 | 第12页 |
| 1.2 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.2.1 鲢鱼资源及其鱼糜制品 | 第12-13页 |
| 1.2.2 鱼糜凝胶化 | 第13-14页 |
| 1.2.3 鱼糜凝胶软化 | 第14页 |
| 1.2.4 内源酶对鱼糜软化的影响 | 第14-16页 |
| 1.2.5 鱼类Cystatins超家族的克隆及表达 | 第16-19页 |
| 1.2.6 鱼源重组Cystatin在抑制鱼糜凝胶软化中的应用研究 | 第19-20页 |
| 1.3 研究目标及内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第22-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 RT-PCR法获得鲢鱼卵cDNA | 第24-25页 |
| 2.2.2 PCR扩增获得鲢鱼卵Cystatin基因片段 | 第25-26页 |
| 2.2.3 重组质粒Cystatin-pMD19-T的克隆与检测 | 第26-29页 |
| 2.2.4 重组原核表达载体Cystatin-pET-32a的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重组融合蛋白trx-Cystatin的诱导表达和可溶性检测 | 第30-32页 |
| 2.2.6 目的蛋白Cystatin的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 重组鲢鱼Cystatin的生物学活性及抑制常数Ki测定 | 第33-36页 |
| 2.2.8 重组鲢鱼Cystatin抑制鲢鱼鱼糜凝胶软化研究 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-55页 |
| 3.1 鲢鱼卵Cystatin的扩增结果 | 第38页 |
| 3.2 重组质粒Cystatin-pMD19-T鉴定 | 第38-40页 |
| 3.2.1 重组质粒Cystatin-pMD19-T的菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 重组质粒Cystatin-pMD1 9-T测序 | 第39-40页 |
| 3.3 重组原核表达载体Cystatin-pET-32a的构建 | 第40-42页 |
| 3.3.1 目的片段Cystatin和表达载体pET-32的酶切回收 | 第40-41页 |
| 3.3.2 重组原核表达载体Cystatin-pET-32a的菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| 3.3.3 重组质粒Cystatin-pET-32a双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 重组融合蛋白trx-Cystatin的诱导表达 | 第42-45页 |
| 3.4.1 重组菌的表达筛选 | 第42-43页 |
| 3.4.2 诱导剂IPTG浓度的筛选 | 第43页 |
| 3.4.3 诱导温度的筛选 | 第43-44页 |
| 3.4.4 诱导时间的筛选 | 第44页 |
| 3.4.5 重组融合蛋白trx-Cystatin的可溶性检测 | 第44-45页 |
| 3.5 目的蛋白Cystatin的纯化 | 第45-48页 |
| 3.5.1 包涵体蛋白trx-Cystatin的分离和洗涤 | 第45页 |
| 3.5.2 重组融合蛋白trx-Cystatin镍亲和层析纯化 | 第45-46页 |
| 3.5.3 重组融合蛋白trx-Cystatin的肠激酶裂解 | 第46页 |
| 3.5.4 目的蛋白Cystatin的SP Sepharose Fast Flow阳离子层析纯化 | 第46-48页 |
| 3.6 重组鲢鱼Cystatin的生物学活性及抑制常数Ki测定 | 第48-51页 |
| 3.6.1 重组鲢鱼Cystatin对木瓜蛋白酶抑制活性的检测 | 第48页 |
| 3.6.2 重组鲢鱼Cystatin对组织蛋白酶B、L抑制活性的检测 | 第48-49页 |
| 3.6.3 重组鲢鱼Cystatin酸碱稳定性 | 第49-50页 |
| 3.6.4 重组鲢鱼Cystatin热稳定性 | 第50页 |
| 3.6.5 重组鲢鱼Cystatin抑制常数Ki测定 | 第50-51页 |
| 3.7 重组鲢鱼Cystatin抑制鲢鱼鱼糜凝胶软化研究 | 第51-55页 |
| 3.7.1 重组鲢鱼Cystatin对鲢鱼鱼糜凝胶结构的影响 | 第51-53页 |
| 3.7.2 重组鲢鱼Cystatin对鲢鱼鱼糜凝胶持水率和白度的影响 | 第53页 |
| 3.7.3 重组鲢鱼Cystatin对鲢鱼鱼糜凝胶中肌球蛋白降解的影响 | 第53-54页 |
| 3.7.4 重组鲢鱼Cystatin对鱼糜凝胶微观结构的作用 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 重组鲢鱼Cystatin的表达与纯化 | 第55页 |
| 4.2 重组鲢鱼Cystatin的性质鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3 重组鲢鱼Cystatin对鱼糜凝胶软化的抑制作用 | 第56-58页 |
| 4.3.1 重组鲢鱼Cystatin抑制鱼糜凝胶软化的作用机制 | 第56-57页 |
| 4.3.2 重组鲢鱼Cystatin抑制鱼糜凝胶软化的效果 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
