| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 功能性甜味剂简介 | 第9页 |
| 1.2 双果糖酐简介 | 第9-11页 |
| 1.2.1 双果糖酐的理化性质 | 第9-10页 |
| 1.2.2 DFAs的来源 | 第10页 |
| 1.2.3 DFAs的生理功能 | 第10-11页 |
| 1.3 果聚糖的生物转化 | 第11-12页 |
| 1.3.1 果聚糖简介 | 第11-12页 |
| 1.3.2 蔗糖菊糖酶简介 | 第12页 |
| 1.4 DFAs生物转化 | 第12-15页 |
| 1.4.1 IFTases简介 | 第12页 |
| 1.4.2 IFTases基因工程研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4.3 不同来源的DFA Ⅰ型IFTases | 第13页 |
| 1.4.4 IFTases晶体结构 | 第13-15页 |
| 1.5 本论文立题依据意义 | 第15页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第15-17页 |
| 2 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.1 主要的实验试剂 | 第17页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第17-18页 |
| 2.2 培养基与化学试剂的配制 | 第18-20页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第18页 |
| 2.2.2 相关试剂的配制 | 第18-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.3.1 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase重组质粒的合成 | 第20页 |
| 2.3.2 E.coli感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 2.3.3 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase重组质粒的转化 | 第20-21页 |
| 2.3.4 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase重组质粒的保藏 | 第21页 |
| 2.3.5 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase重组质粒的抽提制备 | 第21页 |
| 2.3.6 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase抽提质粒的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第21页 |
| 2.3.7 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的诱导表达 | 第21页 |
| 2.3.8 Nolu IFTase、Nosp IFTase和Noba IFTase的分离纯化 | 第21-22页 |
| 2.3.9 Nolu IFTase、Nosp IFTase和Noba IFTase的SDS-PAGE检测 | 第22页 |
| 2.3.10 Nolu IFTase、Nosp IFTase和Noba IFTase的全分子量检测 | 第22页 |
| 2.3.11 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的蛋白浓度检测 | 第22页 |
| 2.3.12 DFA Ⅰ的检测方法 | 第22-23页 |
| 2.3.13 Nolu IFTase、Nosp IFTase和Noba IFTase的催化产物鉴定 | 第23页 |
| 2.3.14 Nolu IFTase、Nosp IFTase和Noba IFTase的酶学性质测定 | 第23-25页 |
| 2.3.15 蔗糖菊糖酶的表达纯化 | 第25页 |
| 2.3.16 温度对蔗糖菊糖酶合成菊糖的影响 | 第25页 |
| 2.3.17 pH对双酶合成DFA Ⅰ的影响 | 第25页 |
| 2.3.18 蔗糖菊糖酶催化蔗糖生成菊糖的反应进程的研究 | 第25页 |
| 2.3.19 Nosp IFTase催化菊糖生产DFA Ⅰ的反应进程研究 | 第25-26页 |
| 2.3.20 DFA Ⅰ的纯化分离 | 第26-27页 |
| 3 结果与讨论 | 第27-48页 |
| 3.1 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的基因序列和氨基酸序列对比分析 | 第27-29页 |
| 3.2 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的分离纯化 | 第29-31页 |
| 3.3 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase酶反应产物的鉴定 | 第31-33页 |
| 3.3.1 HPLC鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 核磁鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的酶学性质 | 第33-42页 |
| 3.4.1 pH对Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase酶活影响 | 第33-34页 |
| 3.4.2 温度对Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase酶活的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.3 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的热稳定性 | 第35-36页 |
| 3.4.4 金属离子对Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase酶活的影响 | 第36页 |
| 3.4.5 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase的动力学参数研究 | 第36-37页 |
| 3.4.6 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase最小底物的分析 | 第37-40页 |
| 3.4.7 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase完全反应产物的分析 | 第40页 |
| 3.4.8 Nolu IFTase、Nosp IFTase、Noba IFTase催化菊糖生成DFA Ⅰ反应进程 | 第40-41页 |
| 3.4.9 不同来源的IFTases酶学性质的比较 | 第41-42页 |
| 3.5 蔗糖菊糖酶与Nosp IFTase双酶高效合成DFA Ⅰ | 第42-48页 |
| 3.5.1 蔗糖菊糖酶的分离纯化 | 第42-43页 |
| 3.5.2 蔗糖菊糖酶反应产物的HPLC鉴定 | 第43页 |
| 3.5.3 温度对蔗糖菊糖酶合成菊糖的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.4 pH对双酶合成DFA Ⅰ的影响 | 第44页 |
| 3.5.5 蔗糖菊糖酶催化蔗糖生成菊糖的反应进程的研究 | 第44-45页 |
| 3.5.6 Nosp IFTase催化菊糖生产DFA Ⅰ的反应进程研究 | 第45-46页 |
| 3.5.7 混合体系中DFA Ⅰ的分离纯化 | 第46-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
