| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语索引 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 概述 | 第12页 |
| 1.2 单增李斯特菌简介 | 第12-19页 |
| 1.2.1 单增李斯特菌分型 | 第13页 |
| 1.2.2 单增李斯特菌致病机理 | 第13-14页 |
| 1.2.3 单增李斯特菌主要毒力因子 | 第14-16页 |
| 1.2.4 单增李斯特菌疫情爆发情况 | 第16页 |
| 1.2.5 单增李斯特菌检测方法 | 第16-19页 |
| 1.3 抗体技术简介 | 第19-21页 |
| 1.3.1 第一代抗体：多克隆抗体（Polyclonal antibody, PcAb） | 第19-20页 |
| 1.3.2 第二代抗体：单克隆抗体（Monoclonal antibody, McAb） | 第20页 |
| 1.3.3 第三代抗体：基因工程抗体（Genetic engineering antibody, GeAb） | 第20-21页 |
| 1.4 展望 | 第21-23页 |
| 第二章 抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的制备 | 第23-38页 |
| 摘要 | 第23页 |
| 前言 | 第23页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株、免疫动物、细胞株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 免疫原的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 单克隆抗体制备 | 第24-28页 |
| 2.2.3 单克隆抗体的评价 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-36页 |
| 2.3.1 小鼠抗血清效价测定 | 第29页 |
| 2.3.2 单克隆抗体的筛选 | 第29页 |
| 2.3.3 单克隆抗体亲和性分析 | 第29页 |
| 2.3.4 单克隆抗体 Westernblot 分析 | 第29-30页 |
| 2.3.5 单克隆抗体的特异性分析（Dot-blot 法） | 第30-33页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的特异性分析（ELISA 法） | 第33-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 抗单核细胞增生性李斯特菌多克隆抗体的制备 | 第38-54页 |
| 摘要 | 第38页 |
| 前言 | 第38-39页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第39页 |
| 3.1.1 菌株、工具酶、试剂盒 | 第39页 |
| 3.1.2 主要材料与试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 LM 基因组的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.2 目的基因的引物设计 | 第40页 |
| 3.2.3 目的基因的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.4 表达载体的构建及鉴定 | 第41页 |
| 3.2.5 目的蛋白的诱导表达及分析 | 第41-42页 |
| 3.2.6 目的蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.7 目的蛋白的 Westernblot 鉴定 | 第43页 |
| 3.2.8 抗原的制备及小鼠免疫 | 第43-44页 |
| 3.2.9 多克隆抗体的亲和性及特异性分析 | 第44-45页 |
| 3.2.10 不同培养基对单增李斯特菌表面膜蛋白 P60 表达量影响的分析 | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-51页 |
| 3.3.1 单增李斯特菌 actA、inlB、iap 基因扩增结果 | 第46-47页 |
| 3.3.2 pGEX-4T-1-actA、pET22b-inlB、pET22b-iap表达载体的构建及鉴定 | 第47页 |
| 3.3.3 ActA、InlB、P60 蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| 3.3.4 InlB 和 P60 蛋白的纯化及 Westernblot 鉴定 | 第48-50页 |
| 3.3.5 抗 InlB 及 P60 蛋白多克隆抗体效价测定及特异性分析 | 第50页 |
| 3.3.6 不同培养基对单增李斯特菌表面膜蛋白 P60 蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 第四章 抗单核细胞增生性李斯特菌单域重链抗体的制备 | 第54-72页 |
| 摘要 | 第54页 |
| 前言 | 第54-55页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第55-56页 |
| 4.1.1 菌株与噬菌体 | 第55-56页 |
| 4.1.2 主要材料与试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-62页 |
| 4.2.1 单增李斯特菌的培养 | 第56页 |
| 4.2.2 抗体及菌体包被浓度的优化 | 第56-57页 |
| 4.2.3 噬菌体文库的淘选 | 第57页 |
| 4.2.4 噬菌体文库的消减 | 第57页 |
| 4.2.5 噬菌体的扩增、纯化和滴度测定 | 第57页 |
| 4.2.6 phage-ELISA 鉴定阳性噬菌体克隆 | 第57-58页 |
| 4.2.7 序列测定与分析 | 第58页 |
| 4.2.8 阳性噬菌体的特异性分析 | 第58页 |
| 4.2.9 阳性噬菌体的克隆及表达 | 第58-59页 |
| 4.2.10 单域重链抗体 L5-78 及 L5-79 的纯化 | 第59-60页 |
| 4.2.11 单域重链抗体 L5-78 及 L5-79 的性能鉴定 | 第60-61页 |
| 4.2.12 单域重链抗体 L5-79 与 4A7 单克隆抗体双抗夹心检测单增李斯特菌 | 第61-62页 |
| 4.2.13 双抗夹心 ELISA 检测模拟污染样品 | 第62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-70页 |
| 4.3.1 确定最佳抗体及菌体包被浓度 | 第62-63页 |
| 4.3.2 淘选过程噬菌体富集监控 | 第63页 |
| 4.3.3 噬菌体富集分析 | 第63-64页 |
| 4.3.4 phage-ELISA 鉴定阳性噬菌体克隆 | 第64-65页 |
| 4.3.5 阳性克隆的序列分析 | 第65-66页 |
| 4.3.6 阳性噬菌体的特异性分析 | 第66-67页 |
| 4.3.7 L5-78 及 L5-79 抗体的表达及 Westernblot 鉴定 | 第67-68页 |
| 4.3.8 L5-78 及 L5-79 的纯化 | 第68-69页 |
| 4.3.9 L5-78 及 L5-79 抗体的鉴定 | 第69-70页 |
| 4.3.10 双抗夹心 ELISA 检测单增李斯特菌 | 第70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-71页 |
| 4.6 小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-75页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.1.1 抗单增李斯特菌单克隆抗体的制备 | 第72页 |
| 5.1.2 抗单增李斯特菌多克隆抗体的制备 | 第72-73页 |
| 5.1.3 抗单增李斯特菌单域重链抗体的制备 | 第73页 |
| 5.2 展望 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录A 实验菌株 | 第83-85页 |
| 附录B 实验仪器设备 | 第85-86页 |
| 附录C 实验试剂药品 | 第86-87页 |
| 附录D 常用试剂的配制 | 第87-88页 |
| 附录E pGEX-4T-1-actA 基因测序 | 第88-90页 |
| 附录F pET22b-inlB 基因序列 | 第90-92页 |
| 附录G pET22b-iap 基因序列 | 第92-93页 |
| 附录H pET25b-L5-78 基因序列 | 第93-94页 |
| 附录I pET25b-L5-79 基因序列 | 第94-95页 |
| 附录J 部分单域重链抗体氨基酸序列 | 第95-96页 |
| 个人介绍 | 第96页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第96页 |
