| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-35页 |
| 1.1 高果糖浆的概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 高果糖浆的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 高果糖浆的类别 | 第13页 |
| 1.1.3 高果糖浆的生产方法 | 第13-16页 |
| 1.1.3.1 化学法生产 | 第14页 |
| 1.1.3.2 酶法生产 | 第14-16页 |
| 1.1.4 高果糖浆的应用 | 第16-17页 |
| 1.1.5 高果糖浆的市场现状 | 第17-18页 |
| 1.2 蛋白质的分子改造 | 第18-24页 |
| 1.2.1 随机进化 | 第18-21页 |
| 1.2.1.1 体外随机进化 | 第19-21页 |
| 1.2.1.2 体内随机进化 | 第21页 |
| 1.2.2 半理性设计 | 第21-23页 |
| 1.2.3 理性设计 | 第23-24页 |
| 1.3 葡萄糖异构酶的概述 | 第24-28页 |
| 1.3.1 葡萄糖异构酶的简介 | 第24页 |
| 1.3.2 葡萄糖异构酶的发展史 | 第24-25页 |
| 1.3.3 葡萄糖异构酶的分子改造 | 第25-28页 |
| 1.3.3.1 葡萄糖异构酶的底物特异性改造 | 第25-26页 |
| 1.3.3.2 葡萄糖异构酶的热稳定性改造 | 第26-27页 |
| 1.3.3.3 葡萄糖异构酶的金属离子结合改造 | 第27-28页 |
| 1.3.3.4 葡萄糖异构酶的最适pH改造 | 第28页 |
| 1.4 本论文的选题意义及研究内容 | 第28-30页 |
| 1.4.1 本论文的选题意义 | 第28-29页 |
| 1.4.2 本论文的研究内容 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二章 葡萄糖异构酶的分子改造 | 第35-51页 |
| 2.1 引言 | 第35-36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-43页 |
| 2.2.1 材料 | 第36-37页 |
| 2.2.1.1 菌株 | 第36页 |
| 2.2.1.2 培养基 | 第36页 |
| 2.2.1.3 主要实验仪器 | 第36页 |
| 2.2.1.4 主要工具酶和试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.2 试验方法 | 第37-43页 |
| 2.2.2.1 质粒的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 突变文库的构建 | 第38页 |
| 2.2.2.3 琼脂糖电泳检测PCR产物 | 第38-39页 |
| 2.2.2.4 PCR产物酶切 | 第39-40页 |
| 2.2.2.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第40页 |
| 2.2.2.6 酶切产物的转化 | 第40-41页 |
| 2.2.2.7 菌落PCR鉴定阳性克隆子 | 第41页 |
| 2.2.2.8 半胱氨酸咔唑法显色初筛 | 第41-42页 |
| 2.2.2.9 液相色谱复筛 | 第42-43页 |
| 2.2.2.10 正突变子序列测定 | 第43页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 2.3.1 分子建模 | 第43-44页 |
| 2.3.2 突变位点的选择 | 第44-46页 |
| 2.3.3 定点突变和饱和突变技术PCR扩增结果 | 第46页 |
| 2.3.4 定点突变和饱和突变阳性克隆子的筛选 | 第46-47页 |
| 2.3.5 高活力突变体的筛选和测序 | 第47-48页 |
| 2.3.6 分子对接和结果分析 | 第48-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第三章 葡萄糖异构酶突变体的分离纯化及酶学性质研究 | 第51-66页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-57页 |
| 3.2.1 菌种与培养基 | 第51页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第51-53页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第53页 |
| 3.2.4 葡萄糖异构酶突变体的制备 | 第53-54页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 3.2.6 酶活测定 | 第54-55页 |
| 3.2.7 蛋白质浓度的测定 | 第55页 |
| 3.2.8 分析方法 | 第55-56页 |
| 3.2.9 葡萄糖异构酶突变体的酶学性质 | 第56-57页 |
| 3.2.9.1 葡萄糖异构酶突变体最适温度的测定 | 第56页 |
| 3.2.9.2 葡萄糖异构酶突变体的温度稳定性研究 | 第56页 |
| 3.2.9.3 葡萄糖异构酶突变体最适pH的测定 | 第56页 |
| 3.2.9.4 葡萄糖异构酶突变体的pH稳定性 | 第56-57页 |
| 3.2.9.5 金属离子对葡萄糖异构酶突变体酶活的影响 | 第57页 |
| 3.2.9.6 葡萄糖异构酶突变体动力学常数的测定 | 第57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 3.3.1 葡萄糖异构酶突变体的分离纯化 | 第57-58页 |
| 3.3.2 葡萄糖异构酶突变体的酶学性质 | 第58-65页 |
| 3.3.2.1 温度对酶活性的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.2.2 酶的热稳定性 | 第59-60页 |
| 3.3.2.3 pH对酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2.4 酶的pH稳定性 | 第61页 |
| 3.3.2.5 金属离子对酶活性的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.2.6 酶反应动力学 | 第63-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 葡萄糖异构酶突变体全细胞转化生产HFCS的研究 | 第66-77页 |
| 4.1 引言 | 第66-67页 |
| 4.2 材料与方法 | 第67-70页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第67页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第67页 |
| 4.2.3 静息细胞的制备 | 第67-68页 |
| 4.2.4 静息细胞转化 | 第68页 |
| 4.2.5 温度对细胞转化反应的影响 | 第68页 |
| 4.2.6 pH对细胞转化反应的影响 | 第68页 |
| 4.2.7 离子浓度对细胞转化反应的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.8 菌体浓度对细胞转化反应的影响 | 第69页 |
| 4.2.9 底物浓度对细胞转化反应的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-75页 |
| 4.3.1 温度对细胞转化反应的影响 | 第70页 |
| 4.3.2 pH对细胞转化反应的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.3 离子浓度对细胞转化反应的影响 | 第71-73页 |
| 4.3.4 菌体浓度对细胞转化反应的影响 | 第73页 |
| 4.3.5 底物浓度对细胞转化反应的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.6 葡萄糖异构酶突变体细胞转化进程 | 第74-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 第五章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 5.1 结论 | 第77-78页 |
| 5.2 展望 | 第78-79页 |
| 硕士期间发表论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
