| 摘要 | 第2-4页 |
| SUMMARY | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述及立题依据 | 第10-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.2.1 透明质酸酶概述 | 第10-12页 |
| 1.2.2 透明质酸酶分离纯化现状 | 第12-16页 |
| 1.2.3 透明质酸酶酶学性质研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2.4 透明质酸酶降解透明质酸机理研究现状 | 第17-18页 |
| 1.3 研究意义与目的 | 第18-19页 |
| 1.4 研究内容 | 第19-21页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 牦牛睾丸透明质酸酶粗酶液制备工艺 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试验原料 | 第22页 |
| 2.1.2 设备与试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 BGHYA1粗酶液制备 | 第23页 |
| 2.2.2 酶活力分析 | 第23-24页 |
| 2.2.3 蛋白定量 | 第24页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE | 第24页 |
| 2.2.5 BGHYA1粗酶液制备条件筛选 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-36页 |
| 2.3.1 标准曲线 | 第25-26页 |
| 2.3.2 粗酶液制备影响因子筛选 | 第26-30页 |
| 2.3.3 PLACKETT-BURMAN试验 | 第30-32页 |
| 2.3.4 最陡爬坡试验 | 第32页 |
| 2.3.5 粗酶液制备条件筛选 | 第32-36页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 牦牛睾丸透明质酸酶的捕获方法 | 第38-51页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 试验样品 | 第38页 |
| 3.1.2 设备与试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 捕获流程 | 第39-40页 |
| 3.2.2 捕获方法 | 第40-41页 |
| 3.2.3 酶活力分析 | 第41页 |
| 3.2.4 蛋白定量 | 第41页 |
| 3.2.5 捕获条件筛选 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-47页 |
| 3.3.1 捕获柱料 | 第42-43页 |
| 3.3.2 捕获PH | 第43-45页 |
| 3.3.3 洗脱流速 | 第45-46页 |
| 3.3.4 洗脱方式、离子强度 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-50页 |
| 3.4.1 柱料对捕获效果的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.2 洗脱PH对捕获效果的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.3 洗脱流速对捕获效果的影响 | 第49页 |
| 3.4.4 洗脱模式、离子强度对捕获效果的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 牦牛睾丸透明质酸酶的精细纯化 | 第51-66页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第51页 |
| 4.1.2 设备与试剂 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 精细纯化流程 | 第52页 |
| 4.2.2 精细纯化方法 | 第52-53页 |
| 4.2.3 酶活力分析 | 第53页 |
| 4.2.4 蛋白定量 | 第53页 |
| 4.2.5 精细纯化试验条件筛选 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 4.3.1 精细纯化柱料 | 第54-56页 |
| 4.3.2 精细纯化柱型 | 第56页 |
| 4.3.3 精细纯化洗脱流速 | 第56页 |
| 4.3.4 精细纯化样品体积 | 第56-59页 |
| 4.3.5 纯化方案 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-65页 |
| 4.4.1 柱料对精细纯化效果的影响 | 第60-62页 |
| 4.4.2 洗脱流速对精细纯化效果的影响 | 第62页 |
| 4.4.3 样品体积、柱床体积对精细纯化效果的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.4 纯化方案制定策略 | 第63-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 牦牛睾丸透明质酸酶鉴定及酶学性质 | 第66-79页 |
| 5.1 材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 试验样品 | 第66页 |
| 5.1.2 仪器与设备 | 第66-67页 |
| 5.2 方法 | 第67-69页 |
| 5.2.1 鉴定 | 第67页 |
| 5.2.2 SDS-PAGE | 第67页 |
| 5.2.3 分子量测定 | 第67-68页 |
| 5.2.4 酶学性质 | 第68-69页 |
| 5.3 结果与分析 | 第69-74页 |
| 5.3.1 鉴定结果 | 第69-70页 |
| 5.3.2 金属离子、抑制剂 | 第70-71页 |
| 5.3.3 最适PH | 第71-72页 |
| 5.3.4 最适温度及热稳定性 | 第72页 |
| 5.3.5 贮藏稳定性 | 第72-73页 |
| 5.3.6 KINETIC PARAMETERS | 第73-74页 |
| 5.3.7 底物特异性 | 第74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-77页 |
| 5.4.1 温度对BGHYA1酶活力的影响 | 第74-75页 |
| 5.4.2 NACL对BGHYA1酶活力的影响 | 第75-76页 |
| 5.4.3 抑制剂对BGHYA1酶活力的影响 | 第76页 |
| 5.4.4 BGHYA1底物特异性 | 第76-77页 |
| 5.4.5 KINETIC PARAMETERS | 第77页 |
| 5.5 小结 | 第77-79页 |
| 第六章 牦牛睾丸透明质酸酶降解透明质酸机理研究 | 第79-93页 |
| 6.1 材料 | 第79页 |
| 6.1.1 试验样品 | 第79页 |
| 6.2 方法 | 第79-81页 |
| 6.2.1 酶活力测定 | 第79-80页 |
| 6.2.2 HPLC分离透明质酸寡聚糖 | 第80-81页 |
| 6.2.3 MALDI-TOF MS鉴定 | 第81页 |
| 6.3 结果与分析 | 第81-89页 |
| 6.3.1 底物浓度对BGHYA1降解HA的影响 | 第81页 |
| 6.3.2 离子强度对BGHYA1降解HA的影响 | 第81-82页 |
| 6.3.3 酸性条件下BGHYA1降解HA的产物 | 第82-83页 |
| 6.3.4 弱酸性条件下BGHYA1降解HA的产物 | 第83-84页 |
| 6.3.5 透明质酸寡聚糖的鉴定 | 第84-87页 |
| 6.3.6 BGHYA1降解透明质酸寡聚糖 | 第87-88页 |
| 6.3.7 奇数透明质酸寡聚糖的形成 | 第88-89页 |
| 6.4 讨论 | 第89-91页 |
| 6.4.1 透明质酸酶降解HA最适PH | 第89-90页 |
| 6.4.2 BGHYA1降解HA机理 | 第90-91页 |
| 6.5 小结 | 第91-93页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第93-95页 |
| 7.1 主要结论 | 第93-94页 |
| 7.2 特色与创新 | 第94页 |
| 7.3 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104-105页 |
| 导师简介 | 第105-106页 |