| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第11-19页 |
| 1.1 单增李斯特菌 | 第11-12页 |
| 1.1.1 概述 | 第11页 |
| 1.1.2 特性 | 第11-12页 |
| 1.1.2.1 生长特性 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 生化特性 | 第12页 |
| 1.1.2.3 抵抗力 | 第12页 |
| 1.2 单增李斯特菌的危害 | 第12-15页 |
| 1.2.1 单增李斯特菌的污染情况 | 第12-14页 |
| 1.2.1.1 乳及乳制品 | 第13页 |
| 1.2.1.2 肉及肉制品 | 第13页 |
| 1.2.1.3 水产品 | 第13页 |
| 1.2.1.4 水果及蔬菜 | 第13-14页 |
| 1.2.2 单增李斯特菌的致病性 | 第14-15页 |
| 1.3 单增李斯特菌的主要毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.3.1 溶血素(hly) | 第15页 |
| 1.3.2 内化素家族(inlA、inlB等) | 第15页 |
| 1.3.3 转录调节因子(prfA) | 第15-16页 |
| 1.3.4 环境调控因子(sigB) | 第16页 |
| 1.4 食品基质培养研究 | 第16-17页 |
| 1.4.1 乳制品 | 第16页 |
| 1.4.2 肉制品 | 第16-17页 |
| 1.4.3 水产品 | 第17页 |
| 1.4.4 果蔬 | 第17页 |
| 1.5 人工胃液 | 第17页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 不同的环境因素下单增李斯特菌生长特性的研究 | 第19-29页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂及药品 | 第19页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.4.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE) | 第20页 |
| 2.1.4.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE) | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌液的制备 | 第21页 |
| 2.2.2 生长曲线的绘制取 | 第21页 |
| 2.2.3 单增李斯特菌在不同温度下的生长特性 | 第21页 |
| 2.2.4 单增李斯特菌在不同NaCl浓度下的生长特性 | 第21-22页 |
| 2.2.5 单增李斯特菌在不同pH下的生长特性 | 第22页 |
| 2.2.6 单增李斯特菌对人工胃液的耐受情况 | 第22页 |
| 2.2.7 结果的统计分析 | 第22页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第22-25页 |
| 2.3.1 四株单增李斯特菌的相关信息 | 第22-23页 |
| 2.3.2 生长曲线的绘制 | 第23页 |
| 2.3.3 四株单增李斯特菌在不同温度下的生长特性 | 第23-24页 |
| 2.3.4 四株单增李斯特菌在不同NaCl浓度下的生长特性 | 第24页 |
| 2.3.5 四株单增李斯特菌在不同pH下的生长特性 | 第24页 |
| 2.3.6 四株单增李斯特菌对人工胃液的耐受情况 | 第24-25页 |
| 2.4 本章小结 | 第25-29页 |
| 第三章 应用RT-qPCR技术研究鱼肉基质模拟体系中单增李斯特菌毒力因子表达 | 第29-42页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第29-31页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第29页 |
| 3.1.2 试剂及药品 | 第29-30页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第30页 |
| 3.1.4 主要培养基 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 菌液的制备 | 第31页 |
| 3.2.2 鱼肉基质模拟体系实验 | 第31页 |
| 3.2.3 引物设计及检验 | 第31-33页 |
| 3.2.3.1 引物设计 | 第31页 |
| 3.2.3.2 引物合成 | 第31页 |
| 3.2.3.3 引物检测 | 第31-33页 |
| 3.2.4 荧光定量RT-PCR | 第33-36页 |
| 3.2.4.1 细菌总RNA提取及提取方法优化 | 第33-34页 |
| 3.2.4.2 RNA纯化及检测 | 第34-35页 |
| 3.2.4.3 cDNA的合成 | 第35页 |
| 3.2.4.4 荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 3.2.5 结果的统计分析 | 第36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 3.3.1 引物特异性及毒力基因检测 | 第36-38页 |
| 3.3.1.1 DNA提取 | 第36页 |
| 3.3.1.2 PCR检测 | 第36-37页 |
| 3.3.1.3 荧光定量PCR检测 | 第37-38页 |
| 3.3.2 RNA提取方法优化结果 | 第38页 |
| 3.3.3 RNA纯化及检测 | 第38-39页 |
| 3.3.4 鱼肉基质模拟体系实验 | 第39-40页 |
| 3.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 第四章 应用RT-qPCR技术研究胃消化模拟体系中单增李斯特菌毒力因子表达 | 第42-55页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第42页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第42页 |
| 4.1.2 试剂及药品 | 第42页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第42页 |
| 4.1.4 主要培养基 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 菌液的制备 | 第42-43页 |
| 4.2.2 胃消化模拟体系实验 | 第43页 |
| 4.2.3 引物的检验 | 第43页 |
| 4.2.4 荧光定量RT-PCR | 第43页 |
| 4.2.5 结果的统计分析 | 第43页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第43-52页 |
| 4.3.1 引物特异性及毒力基因检测 | 第43-44页 |
| 4.3.1.1 DNA提取 | 第43-44页 |
| 4.3.1.2 PCR检测 | 第44页 |
| 4.3.2 RNA纯化及检测 | 第44-45页 |
| 4.3.3 模拟胃环境耐受实验 | 第45-46页 |
| 4.3.4 人工胃液对毒力因子表达水平的影响 | 第46-52页 |
| 4.4 本章小结 | 第52-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63页 |
