| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-50页 |
| 1 前言 | 第17-18页 |
| 2 影响纯生啤酒泡沫稳定性的因素 | 第18-25页 |
| ·啤酒的泡沫性质 | 第18页 |
| ·啤酒泡沫的物理特性 | 第18-21页 |
| ·啤酒泡沫的化学分子特性 | 第21-22页 |
| ·啤酒的化学成分及其对泡沫的影响 | 第22-23页 |
| ·发酵菌种和生产原料对啤酒泡沫的影响 | 第23-24页 |
| ·生产工艺对啤酒泡沫的影响 | 第24-25页 |
| 3 与啤酒泡沫相关的主要的蛋白和蛋白酶 | 第25-44页 |
| ·Z-蛋白 | 第25-27页 |
| ·脂转移蛋白1(LTP1) | 第27-35页 |
| ·脂转移蛋白1(LTP1)的构成 | 第27-29页 |
| ·脂转移蛋白1(LTP1)的生物学功能 | 第29-31页 |
| ·脂转移蛋白1(LTP1)对啤酒泡沫的影响 | 第31-34页 |
| ·脂转移蛋白1(LTP1)在植物中的表达 | 第34-35页 |
| ·酿酒酵母蛋白酶A | 第35-42页 |
| ·蛋白酶A的编码 | 第35-36页 |
| ·酵母蛋白酶A的结构 | 第36页 |
| ·蛋白酶A的生化特性 | 第36-38页 |
| ·蛋白酶A的分泌途径 | 第38-39页 |
| ·酵母蛋白酶A对啤酒泡沫稳定性的影响 | 第39-40页 |
| ·蛋白酶A的测定 | 第40-42页 |
| ·液泡内的其它蛋白酶 | 第42-44页 |
| 4 改善纯生啤酒泡沫的主要策略 | 第44-45页 |
| ·选用优质的生产菌株和原辅料 | 第44页 |
| ·优化生产工艺 | 第44页 |
| ·使用泡沫添加剂 | 第44-45页 |
| 5 利用同源重组技术在酿酒酵母中表达外源基因 | 第45-48页 |
| ·同源重组 | 第45-46页 |
| ·外源基因在酿酒酵母细胞中的表达 | 第46-47页 |
| ·基因工程技术对啤酒质量的改善 | 第47-48页 |
| ·提高啤酒的胶体稳定性 | 第47页 |
| ·提高生香物质含量 | 第47页 |
| ·选育嗜杀啤酒酵母 | 第47-48页 |
| ·分解葡聚糖 | 第48页 |
| 6 前景与展望 | 第48-49页 |
| 7 选题背景与研究思路 | 第49-50页 |
| 第二章 大麦Ltp1酿酒酵母表达盒的构建 | 第50-81页 |
| 1 前言 | 第50-51页 |
| 2 材料和方法 | 第51-60页 |
| ·材料、主要试剂和仪器设备 | 第51-53页 |
| ·种子、菌株、质粒 | 第51页 |
| ·主要试剂及配制 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-60页 |
| ·二棱大麦(Hordeum vulgare)基因组提取 | 第53-54页 |
| ·酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组提取 | 第54-55页 |
| ·大麦Ltp1酿酒酵母表达盒的构建 | 第55-60页 |
| 3 结果与讨论 | 第60-80页 |
| ·基因片段的扩增 | 第60-65页 |
| ·大麦脂转移蛋白1编码基因(Ltp1)的扩增 | 第60-61页 |
| ·乙醇脱氢酶启动子(ADH1 promoter,ADH1_p)序列的扩增 | 第61-62页 |
| ·分泌信号MFα1_s的扩增 | 第62-63页 |
| ·酿酒酵母细胞色素C终止子(CYC1 terminator,CYC1_T)序列的扩增 | 第63-64页 |
| ·KanMX的扩增 | 第64-65页 |
| ·大麦Ltp1表达盒的构建 | 第65-80页 |
| ·MFα1_s与Ltp1基因片段的三引物连接 | 第65-67页 |
| ·ML片段与CYC1终止子DNA片段的连接 | 第67-68页 |
| ·复合DNA片段MLC的PCR鉴定 | 第68-69页 |
| ·ADH1启动子克隆到载体pUC18 | 第69-72页 |
| ·复合DNA片段MLC克隆到质粒pUC-ADH1p | 第72-80页 |
| 4 小结 | 第80-81页 |
| 第三章 大麦Ltp1酿酒酵母表达盒的测试 | 第81-96页 |
| 1 前言 | 第81-82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-88页 |
| ·材料、主要试剂和仪器 | 第82-84页 |
| ·菌株、质粒 | 第82页 |
| ·主要试剂及配制 | 第82-83页 |
| ·培养基 | 第83页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-88页 |
| ·PCR 引物的合成 | 第84页 |
| ·基因片段的PCR扩增 | 第84页 |
| ·酶切与连接 | 第84-85页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第85页 |
| ·酿酒酵母的电击转化 | 第85-87页 |
| ·酿酒酵母转化子的筛选 | 第87页 |
| ·表达产物的检测 | 第87-88页 |
| 3 结果与分析 | 第88-94页 |
| ·DNA片段KAMLC的PCR扩增 | 第88-90页 |
| ·DNA片段KAMLC的鉴定 | 第90页 |
| ·质粒YEp181-KAMLC的构建 | 第90页 |
| ·质粒YEp181-KAMLC的鉴定 | 第90-92页 |
| ·酿酒酵母转化子的鉴定 | 第92-93页 |
| ·大麦LTP1的HPLC标准曲线 | 第93-94页 |
| ·YEp181-KAMLC酿酒酵母转化子LTP1的分泌表达 | 第94页 |
| 4 讨论 | 第94-95页 |
| 5 小结 | 第95-96页 |
| 第四章 大麦Ltp1表达盒在酿酒酵母PEP4位点的重组 | 第96-113页 |
| 1 前言 | 第96-97页 |
| 2 材料与方法 | 第97-105页 |
| ·材料、主要试剂和仪器 | 第97-100页 |
| ·菌株、质粒 | 第97页 |
| ·主要试剂及配制 | 第97-99页 |
| ·酿酒酵母培养基 | 第99-100页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第100页 |
| ·实验方法 | 第100-105页 |
| ·PCR引物的合成 | 第100-101页 |
| ·酿酒酵母同源重组转化DNA片段的PCR扩增 | 第101页 |
| ·PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第101-102页 |
| ·酿酒酵母的电击转化 | 第102页 |
| ·酿酒酵母转化子的筛选 | 第102页 |
| ·表达产物的免疫印迹检测 | 第102-105页 |
| 3 结果和分析 | 第105-111页 |
| ·重组转化DNA片段的PCR扩增 | 第105-106页 |
| ·酿酒酵母转化子的筛选与鉴定 | 第106-108页 |
| ·重组位点鉴定 | 第106-107页 |
| ·重组位点的等位基因 | 第107-108页 |
| ·重组子基因型的确定 | 第108页 |
| ·表达产物的变性电泳 | 第108-110页 |
| ·表达产物的免疫学检测 | 第110-111页 |
| 4 讨论 | 第111-112页 |
| ·基因重组的位点 | 第111-112页 |
| ·酿酒酵母重组子发酵产物的蛋白电泳 | 第112页 |
| 5 小结 | 第112-113页 |
| 第五章 酿酒酵母重组子抗性标记基因的删除 | 第113-130页 |
| 1 前言 | 第113-114页 |
| 2 材料与方法 | 第114-121页 |
| ·材料、主要试剂和仪器 | 第114-116页 |
| ·菌株和质粒 | 第114页 |
| ·主要试剂及配制 | 第114页 |
| ·培养基 | 第114-115页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116-121页 |
| ·ZeoCassette的PCR扩增 | 第116页 |
| ·Gall Promoter的PCR扩增 | 第116-117页 |
| ·TEF promoter的PCR扩增 | 第117-118页 |
| ·Gall promoter与ZeoCassette的连接 | 第118页 |
| ·TEF promoter与DNA片段EM7_p-Sh ble-CYCl_T-Gall_p的连接 | 第118页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的构建 | 第118页 |
| ·质粒pSH47/ZEO对酿酒酵母重组子S.c-ltp1的转化 | 第118页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的酿酒酵母转化子的筛选及鉴定 | 第118-119页 |
| ·Cre重组酶的诱导表达 | 第119页 |
| ·KanMX~-菌株的筛选 | 第119页 |
| ·KanMX~-菌株的PCR鉴定 | 第119-120页 |
| ·KanMX~-菌株的G418抗性实验 | 第120页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的去除 | 第120页 |
| ·丢失质粒pSH47/ZEO的酵母菌株的PCR鉴定 | 第120页 |
| ·重组菌株S.c-ltp1中Ltp1表达盒完整性的PCR验证 | 第120-121页 |
| 3 结果和分析 | 第121-128页 |
| ·ZeoCassette、Gall Promoter和TEF Promoter的PCR扩增 | 第121-123页 |
| ·ZeoCassette与Gall Promoter的连接 | 第123页 |
| ·TEF promoter与DNA片段EM7p-Sh ble-CYC1_T-Gall_P的连接 | 第123-124页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的构建 | 第124页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的酿酒酵母转化子的PCR鉴定 | 第124-125页 |
| ·KanMX~-菌株的鉴定 | 第125-126页 |
| ·质粒pSH47/ZEO的丢失 | 第126-127页 |
| ·重组菌株S.c-Ltp1中Ltp1表达盒的完整性 | 第127-128页 |
| 4 讨论 | 第128-129页 |
| ·质粒pSH47的改造 | 第128-129页 |
| ·KanMX标记基因的删除 | 第129页 |
| 5 小结 | 第129-130页 |
| 第六章 重组酵母菌株的遗传稳定性及其发酵性能 | 第130-141页 |
| 1 前言 | 第130页 |
| 2 材料与方法 | 第130-134页 |
| ·材料和主要试剂 | 第130-131页 |
| ·酵母菌株 | 第130页 |
| ·培养基 | 第130-131页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第131页 |
| ·主要仪器和设备 | 第131页 |
| ·实验方法 | 第131-134页 |
| ·重组菌与对照菌的继代培养 | 第131-132页 |
| ·重组菌株抗性丢失的遗传稳定性 | 第132页 |
| ·重组菌株Ltp1表达盒的遗传稳定性 | 第132页 |
| ·蛋白酶A的活性 | 第132-133页 |
| ·大麦LTP1的表达 | 第133页 |
| ·生长性能试验 | 第133页 |
| ·发酵力试验 | 第133-134页 |
| ·凝聚性试验 | 第134页 |
| 3 结果和分析 | 第134-140页 |
| ·重组子抗性丢失的遗传稳定性 | 第134-135页 |
| ·重组子Ltpl表达盒的遗传稳定性 | 第135-136页 |
| ·脂转移蛋白1的分泌性能及传代稳定性 | 第136-138页 |
| ·生长性能 | 第138-139页 |
| ·发酵性能 | 第139页 |
| ·凝聚性 | 第139-140页 |
| 4 讨论 | 第140页 |
| 5 小结 | 第140-141页 |
| 第七章 重组菌株的酿酒试验 | 第141-146页 |
| 1 前言 | 第141页 |
| 2 材料与方法 | 第141-143页 |
| ·酵母菌种及原料 | 第141页 |
| ·主要仪器 | 第141-142页 |
| ·实验方法 | 第142-143页 |
| ·麦汁培养基的制备 | 第142页 |
| ·啤酒酿造试验方法 | 第142-143页 |
| ·理化指标及性能分析 | 第143页 |
| 3 结果与讨论 | 第143-144页 |
| ·各种理化指标的测定结果 | 第143页 |
| ·酵母菌性能测试 | 第143-144页 |
| 4 小结 | 第144-146页 |
| 第八章 主要结论 | 第146-150页 |
| ·结论 | 第146-148页 |
| ·主要创新成果 | 第148页 |
| ·展望 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 攻读博士期间发表学术论文 | 第170页 |
