| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 前言 | 第9页 |
| 1.2 胆固醇与人体健康 | 第9-11页 |
| 1.2.1 胆固醇的合成与代谢 | 第9-10页 |
| 1.2.2 体内胆固醇的计量方法与健康问题 | 第10-11页 |
| 1.3 胆盐水解酶对降低胆固醇重要作用的研究 | 第11-14页 |
| 1.3.1 不同乳酸菌种的降胆固醇活性 | 第11-12页 |
| 1.3.2 乳酸菌降胆固醇机理的研究 | 第12-13页 |
| 1.3.3 降胆固醇活性乳酸菌的生理生化特性研究 | 第13-14页 |
| 1.4 胆盐水解酶(BSH) | 第14-18页 |
| 1.4.1 产BSH的菌株 | 第15-16页 |
| 1.4.2 BSH的基本酶学性质 | 第16页 |
| 1.4.3 BSH的底物特异性与催化部位 | 第16-18页 |
| 1.5 基因工程技术在胆盐水解酶研究中的应用 | 第18-19页 |
| 1.5.1 胆盐水解酶的基因克隆和异源表达 | 第18-19页 |
| 1.5.2 融合蛋白标签的应用 | 第19页 |
| 1.6 本课题的研究内容及口的 | 第19-21页 |
| 1.6.1 本课题的研究目的 | 第19-20页 |
| 1.6.2 本课题的研究内容 | 第20页 |
| 1.6.3 本课题的研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 胆盐水解酶基因(bsh)的克隆和异源重组 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌种 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试剂与工具酶 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.2.4 培养基与试剂 | 第22页 |
| 2.3 试验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 引物设计及PCR | 第22-23页 |
| 2.3.2 DNA片段的T载体连接 | 第23页 |
| 2.3.3 重组融合蛋白表达质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.3.4 重组宿主大肠杆菌的选择及重组质粒鉴定 | 第24页 |
| 2.4 结果 | 第24-29页 |
| 2.4.1 基因片段的生物信息学分析 | 第24-26页 |
| 2.4.2 基因克隆片段及重组质粒构建 | 第26-28页 |
| 2.4.3 重组质粒的构建和验证 | 第28-29页 |
| 2.4.4 选择最佳感受态细胞 | 第29页 |
| 2.5 总结 | 第29-31页 |
| 第三章 BSH的表达及融合标签的高效应用 | 第31-38页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第31-32页 |
| 3.2.1 试验菌株及药品 | 第31页 |
| 3.2.2 主要试剂配置 | 第31-32页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第32页 |
| 3.3 试验方法 | 第32-33页 |
| 3.3.1 BSH在不同宿主中的表达 | 第32页 |
| 3.3.2 BSH在不同融合标签的表达 | 第32页 |
| 3.3.3 诱导条件的优化 | 第32-33页 |
| 3.4 试验结果 | 第33-36页 |
| 3.4.1 BSH在宿主中的表达 | 第33-35页 |
| 3.4.2 BSH在不同融合标签的表达 | 第35页 |
| 3.4.3 诱导剂条件对BSH蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 重组菌BSH粗酶液提取方法的研究 | 第38-46页 |
| 4.1 前言 | 第38页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 4.2.1 试剂 | 第38页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第38-39页 |
| 4.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.3.1 菌体准备 | 第39页 |
| 4.3.2 平板Ca~(2+)沉淀法检测 | 第39页 |
| 4.3.3 细胞破碎条件的确定 | 第39-40页 |
| 4.3.4 粗酶液BSH活力检测 | 第40-41页 |
| 4.4 实验结果 | 第41-44页 |
| 4.4.1 平板Ca~(2+)沉淀法检测 | 第41页 |
| 4.4.2 细胞破碎条件的选择 | 第41-43页 |
| 4.4.3 MBP-BSH初酶活力检测 | 第43-44页 |
| 4.5 讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 重组菌BSH粗酶液纯化方法的比较 | 第46-56页 |
| 5.1 前言 | 第46页 |
| 5.2 试剂与仪器 | 第46-48页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第46-48页 |
| 5.2.2 其他试剂及材料 | 第48页 |
| 5.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 5.4 实验结果 | 第50-55页 |
| 5.4.3 BSH的非还原SDS-PAGE凝胶电泳 | 第53-54页 |
| 5.4.4 纯化后BSH的活力测定与酶学特性探索 | 第54-55页 |
| 5.5 讨论 | 第55-56页 |
| 第六章 总结 | 第56-58页 |
| 6.1 课题的研究结论 | 第56页 |
| 6.2 课题的创新点 | 第56-57页 |
| 6.3 课题的展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 期间发表的学术论文及研究成果 | 第64-65页 |
| 基金项目支持 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附页 | 第67页 |