| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 引言 | 第11-23页 |
| 1 我国水产品质量安全现状 | 第11-12页 |
| ·食源性疾病多发 | 第11页 |
| ·水产品药残超标严重 | 第11-12页 |
| 2 食品安全与病原微生物 | 第12-14页 |
| 3 本研究涉及的四种食源性致病菌 | 第14-17页 |
| ·沙门氏菌简介 | 第14页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌简介 | 第14-15页 |
| ·金黄色葡萄球菌简介 | 第15-16页 |
| ·副溶血性弧菌简介 | 第16-17页 |
| 4 食源性致病菌的检测方法 | 第17-20页 |
| ·食源性致病菌的免疫学检测方法 | 第17-18页 |
| ·食源性致病菌的分子生物学检测方法 | 第18-20页 |
| 5 抗菌肽简介 | 第20页 |
| 6 抗菌肽研究现状 | 第20-21页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第一部分 多重PCR 技术在水产品安全中的应用 | 第23-42页 |
| 第一章 四种病原菌的多重PCR 检测方法的建立 | 第23-34页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第23-24页 |
| ·仪器和设备 | 第24页 |
| ·培养基与试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·细菌总DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒纯化DNA | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·单重PCR 的反应体系和条件 | 第27-28页 |
| ·多重PCR 的优化 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·三种菌的单重PCR 结果 | 第28-29页 |
| ·引物特异性的考察结果 | 第29-30页 |
| ·三种菌的多重PCR 检测及其反应条件的优化 | 第30-32页 |
| ·本章小结 | 第32-34页 |
| 第二章 模拟污染样品的检测 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·南美白对虾 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第34-35页 |
| ·仪器和设备 | 第35页 |
| ·培养基与试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·菌种的扩增 | 第36页 |
| ·模拟污染样品的制备 | 第36-37页 |
| ·菌组DNA 的提取 | 第37页 |
| ·模拟污染样品的单重PCR 和多重PCR 检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-39页 |
| ·模拟污染样品的单重PCR 检测结果 | 第37-38页 |
| ·模拟样品的多重PCR 检测结果 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 结论 | 第41-42页 |
| 第二部分 重组DNA 技术在水产品安全中的应用 | 第42-62页 |
| 第一章 斑点叉尾鮰LEAP-2 成熟肽基因mleap-2 的cDNA 克隆及序列分析 | 第42-52页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·菌种 | 第42页 |
| ·质粒 | 第42-43页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·成熟肽基因mIeap-2 的PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·加酶切位点的成熟肽基因片段mIeap-2 的PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第46页 |
| ·成熟肽基因mIeap-2 的纯化 | 第46页 |
| ·成熟肽基因mIeap-2 的cDNA 克隆 | 第46-48页 |
| ·超级感受态细胞Top10 的制备 | 第46-47页 |
| ·pSURE-T-mleap-2 重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·重组质粒的转化 | 第47-48页 |
| ·阳性克隆的PCR 插入检验 | 第48页 |
| ·重组质粒的扩大培养 | 第48页 |
| ·成熟肽基因mIeap-2 的序列测定 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-50页 |
| ·成熟肽片段mIeap-2 的PCR 扩增结果 | 第49页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第49-50页 |
| ·成熟肽片段mIeap-2 的序列分析 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第二章 重组表达载体pET30a-mleap-2 的构建及检验 | 第52-61页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·质粒 | 第52页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| ·主要试剂的配制 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-58页 |
| ·超级感受态细胞BL21(DE3)的制备 | 第54-55页 |
| ·目的片段mIeap-2 的双酶切回收 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pSURE-T-mIeap-2 的提取 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pSURE-T-mIeap-2 的双酶切 | 第56页 |
| ·pET30a 质粒的双酶切回收 | 第56页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·pET30a-mleap-2 重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第58页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-60页 |
| ·重组表达质粒pET30a-mleap-2 的阳性克隆鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组表达质粒pET30a-mleap-2 的双酶切鉴定 | 第59-60页 |
| ·BL21-重组质粒序列测定 | 第60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第三章 结论 | 第61-62页 |
| 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
